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• 二、农药的分类 （一）.按化学成分可分为有机氯、有机磷、氨基甲
酸酯类、拟除虫菊酯类及砷、汞、铜、硫磺等制 剂。 （二）.按用途可分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植
• 农药在防治农作物病虫害和杂草、提高农业产量 方面具有显著的效果。
• 农药与人、动物的健康有着密切的关系。农药 的使用，杀灭了一些病原及传播媒介，使某些疾 病得到了控制，在一定程度上提高了人类的健康 水平。提高农畜产品的产量和质量等方面，起着 重要的作用。
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 五、采样
• （一）采样原则：对每一货批按5点抽样法随机取样，将 样品缩分后抽取2kg，取1kg样品作为备样，备样应低温保 存。
•随机≠随意
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• （二）采集对象：
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第二节 蔬菜农药残留检测的方法
• 一、农药残留的概念 • 农药残留(pesticide residues)是指农药
施用后，残存在生物体、农副产品和环境 中的微量农药原体、有毒代谢产物、降解 物和杂质的总称。残留的数量叫残留量。
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• 二、农药残留检测的方法
• （一）速测卡法（纸片法，GB/T5009.199— 2002）
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 原理示意图：
•以RP-410型农药残毒快速检测仪为
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 二、试剂的配置及保存
• （一）提取试剂 • 配制：使用时每袋提取试剂用1000ml蒸馏水溶解
蔬菜农药残留快速检测 技术
2020年7月27日星期一
主要内容
• 第一节 农药概述 • 第二节 蔬菜农药残留检测的方法
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第一节 农药概述
• 一、农药的概念 农药(pesticides)是指用于防治危害农作物
及农副产品病虫害、杂草及其他有害生物的 药物总称。
现在农药不仅应用于农业，而且也广泛应 用于畜牧业、林业和公共卫生事业等方面
。
• 保存：固体及溶解后的提取试剂均在常温下保存 。
• （二）专用酶 • 配制：使用时每支酶粉用10ml提取试剂溶解。 • 保存：粉状的酶应储存在冷冻室内（约-18℃），
用时用提取试剂溶解，溶解后的酶液分成2-4小瓶 ，暂时不用的储存在冷冻室内，用时解冻，用后 的酶液储存在冷藏室（0-5℃）内，• 在一周内用
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002）
三、试剂 • 1、速测卡：固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的
纸片。 • 2、洗脱液（pH7.5缓冲溶液）：取15.0g磷酸氢二
钠[Na2HPO4·12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾 [KH2PO4]，用500mL蒸馏水溶解。 四、仪器 • 1、常量天平 • 2、37℃±2℃恒温装置（恒温培养箱或恒温水浴 锅）
• 四、检测范围及灵敏度 • （一）蔬菜：叶菜、果菜、豆菜、瓜菜（除胡
萝 卜、韭菜、茭白、蘑菇等）
• （二）农药
• 1、有机磷类： • 甲胺磷、对硫磷、氧化乐果、甲拌磷、久效磷、
敌敌畏、杀扑磷等（灵敏度0.5-5㎎/㎏） • 甲基对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、毒死蜱、
乐果等（灵敏度8-10 ㎎/㎏ ）
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002）
放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才 有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药 片表面缓冲溶液加得过少、预反应后的药片表 面不够湿润，二是温度太低。 （三）速测卡对农药非常敏感，测定时如果附近 喷洒农药或使用卫生杀虫剂，以及操作者和器 具沾有微量农药，都会造成对照和测定药片不 变蓝。 （四）红色药片与白色药片叠合反应时间以3min 为准，3min后的蓝色会逐渐加深，24h后颜色 会逐渐褪去。
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 7、配套试剂 • 酶（7支）、底物（5瓶）、显色剂（瓶）、提取
试剂（20包）可检测1125个样本。 • 8、配套设施 • 冰箱、电热蒸馏水器、大理石工作台、仪器柜、
写字台、垃圾桶等。
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 根据农业部第199号公告，从2002年6月5日起，禁止甲拌磷 ，甲基异柳磷，特丁硫磷，甲基硫环磷，治螟磷，内吸磷， 克百威，涕灭威，灭线磷，硫环磷，蝇毒磷，地虫硫磷，氯 唑磷，苯线磷在蔬菜、果树、茶叶、中草药材上使用，禁止 三氯杀螨醇和氰戊菊酯在茶树上使用。
• 根据农业部第274号公告，从2003年6月1日起，禁止丁酰肼 （比久）在花生上使用。
藏室内（0-5℃）。
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 三、农残速测实验室仪器配置
• 仪器名称
• 1、RP-410农药残毒快速检测仪
• 2、台式恒温培养箱
• 3、微型样本混合器
• 4、电子天平（精确度0.1g）
• 5、移液枪及其配套管嘴
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可调移液枪
40-200ul
• 根据农业部第322号公告，从2007年6月1日起，禁 止下列农药在农业上使用：甲胺磷、对硫磷、甲基 对硫磷、久效磷和磷胺。
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• （二）、限制使用的农药
• 根据农业部第194号公告禁止氧乐果在甘蓝上使用，甲基异 硫磷在果树上，涕灭威在苹果树上，克百威在柑桔树上，甲 拌磷在柑桔树上，特丁硫磷在甘蔗上使用。
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• 四、国家限用、禁用的农药
• （一）、国家明令禁止使用的农药
• 农业部第199号公告，从2002年6月5日起禁止使用下 列农药：六六六（HCH），滴滴涕（DDT），毒杀芬 ，二溴氯丙烷，杀虫脒，二溴乙烷(EDB)，除草醚， 艾氏剂,狄氏剂，汞制剂，砷、铅类，敌枯双，氟乙 酰胺，甘氟，毒鼠强，氟乙酸钠，毒鼠硅。
酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 完，酶液反复解冻最多不能超多两次，否则会影 响酶的活性。
• （三）底物 • 配制：使用时每瓶底物用10ml提取试剂溶解。 • 保存：固体及溶解后的底物均应保存在冰箱的冷
藏室内（0-5℃）。 • （四）显色剂 • 配制：使用时每瓶显色剂用10ml提取试剂溶解。 • 保存：固体及溶解后的底物均应保存在冰箱的冷
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
一、原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆 碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的 浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代 谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂 反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测 定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过 抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或 氨基甲酸酯类农药的存在。
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
• 2、氨基甲酸酯类：
• 克百威、涕灭威、灭多威、丙硫克百威、丁硫克 百威、抗蚜威、仲丁威、苏灭威、残杀威、西维 因、叶蝉散（灵敏度0.2-2.5 ㎎/㎏ ）。
• 注：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、 茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影 响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株(体)蔬菜浸提 。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取 整株(体)蔬菜浸提的方法，减少色素的干 扰。
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002）
• 六、结果判定：
检测结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑 制（阳性）、未抑制（阴性）表示，具体见下表 ：
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002） • 阳性结果
• 阴性结果
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002） • 七、部分常见农药的检出限及最大残留限
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1-5ml
数量
1 1 1 1
1 1
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酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、NY/T 4482001）
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管嘴
40-200ul
100
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1-5ml
25
•
96孔60型管嘴盒
1
• 6、其他小零件及玻璃仪器
• 定量加液器（20ml）*2、定时钟*2、取样器*2、提取瓶 *20、玻璃棒*2、镊子*2、洗瓶*2、储液瓶（1000ml）*2 、试管*20、平底小试管*20、量筒（500、20ml）各两个 、烧杯（100、250、500、1000ml）各两个、橡胶垫*2、 移液管（10、20m）各一支、容量瓶（1000ml）*1、大试 管架*1、小试管架*1、标准口三角瓶*2、小试剂瓶*5，还 有清洁刷、洗耳球、滤纸、蒸馏水瓶、记号笔、丝绸抹布 等。
量（单位：mg/kg）
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002）
• 八、速测卡法的使用注意事项 • （一）葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白
、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生 物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采 取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一 些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬 菜浸提的方法，减少色素的干扰。 • （二）当温度条件低于37℃，酶反应的速度随之 放慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长， 延长时间的确定，应以空白对照卡用（体温）手 指捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品
• （二）酶抑制法（GB/T 5009.199-2002、 NY/T 448-2001）
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速测卡法（纸片法，GB/T 5009.199—2002） • 一、原理