脐带间充质干细胞扩增培养方法
采用无血清培养基（可含10%受者灭活血清）将 细胞调成悬液，按2×10^4/cm^2接种于培养 瓶， 37℃、5%的CO2条件下培养4d后全量换液， 吸弃非贴壁细胞。每3d换液，细胞覆盖瓶底80% 时，0.25%胰蛋白酶-1mmol/L EDTA消化，按1： 3传代。培养3周左右，胰酶消化细胞，细胞悬液 2000r/min离心5min，弃上清后加入生理盐水混匀， 2000r/min离心5min，重复2次。
脐带间充质干细胞培养结果
新分离的脐带单个核细胞呈纺锤形
原代培养6h后有大量细胞贴壁，贴 壁细胞呈梭形、多角形
培养7天细胞呈长梭形，细胞平行或 漩涡状排列。培养10天细胞可达 80%融合。传代后的细胞形态无明显 改变，排列更加整齐。
脐带间充质干细胞在临床上的应用
1.能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗 红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降 低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提 高细胞或器官移植的成功率。
酶消化法
培养方法
组织块贴壁法
酶消化法
• 去除血管，将脐带组织剪成1~3cm大小组织块， 用无血清培养基洗2次，将组织浸泡在0.1%胶原 酶中，37℃消化4~6小时。加入生理盐水（消化 液体积的2倍），2000r/min离心5min，弃上清， 加入2.5%胰蛋白酶，37℃处理30min，加入生理 盐水（消化液体积的2倍），100目滤网过滤，滤 液2000r/min离心5min，弃上清。重复两次。细胞 计数，将细胞调成一定浓度用于培养。
组织块贴壁法
• 取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净后，用剪刀镊 子剔去血管，剥出里面的华通氏胶，将所得组织 充分剪碎至1 mm^3大小，加入α-MEM培养液置 于37℃，5%的CO2培养箱培养，培养液中含10% FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素。脐带组 织培养5-7天后，可见有部分细胞从组织块周围爬 出，形态呈细小的梭形，一周后，细胞开始迅速 增殖，形成大小不等的细胞集落。
2.能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞 移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共 移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾 病的治疗效果。
3.能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗 骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝 病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。 4.能在体内或体外通过生物因子定向诱导分 化为神经细胞、胰岛素分泌细胞等，从而 为帕金森、糖尿病等治疗提供新的治疗方 式，是目前干细胞研究的热点之一
脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分 化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、 软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内 皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床 应用前景。从人脐带中分离出MSCs，细胞 含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性 比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦 理学争议等优点，因此越来越受到研究工 作者们的关注。
脐带间充质干细胞
定义
• 脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织 中的一种多功能干细胞，它能分化成许多 种组织细胞 。 • 表型特征： CD31-,CD34-,CD45,CD44+,CD73+,CD90+,ห้องสมุดไป่ตู้D105+,HLA-DR-
特点与优势