临床技术操作规范病理部分第1章总则一、为提高病理学诊断质量，促进临床工作，依据《中华人民共和国执业医师法》精神，结合医院病理科工作的特点，制定本规范。

二、医院病理科和承担医院病理科任务的医学院校病理教研室的要紧临床任务是通过活体组织病理学检查（简称活检）、细胞病理学检查（简称细胞学检查）和尸体剖检（简称尸检）等作出疾病的病理学诊断（或称病理诊断）。

具有一定规模的病理科，应积极开展教学、培训病理医师和科学研究等项工作。

三、病理学诊断是病理医师应用病理学知识、有关技术和个人专业实践体会，对送检的患者标本（或称检材，包括活体组织、细胞和尸体等）进行病理学检查，结合有关临床资料，通过分析、综合后，作出的关于该标本病理变化性质的判定和具体疾病的诊断。

病理学诊断为临床医师确定疾病诊断、制定治疗方案、评估疾病预后和总结诊治疾病体会等提供重要的、有时是决定性的依据，并在疾病预防，专门是传染病预防中发挥重要作用。

四、病理学诊断报告书（或称病理诊断报告）是关于疾病诊断的重要医学文书。

当涉及医、患间医疗争议时，相关的病理学诊断报告书具有法律意义。

病理学诊断报告书应由具有执业资格的注册主治医师以上（含主治医师）的病理医师签发。

各医院可酌情准予条件适宜的高年资病理科住院医师试行签署病理学诊断报告书。

低年资病理科住院医师、病理科进修医师和非病理学专业的医师不得签署病理学诊断报告书。

五、病理学检查是临床医师与病理医师为确立疾病诊断而进行的合作行为，是有关临床科室与病理科之间专门形式的会诊。

临床医师和病理医师双方皆应认真履行各自的义务和承担相应的责任。

六、病理学检查申请单是临床医师向病理医师发出的会诊邀请单。

病理学检查申请单的作用是：临床医师向病理医师传递关于患者的要紧临床信息（包括症状、体征、各种辅助检查结果和手术所见等）、诊断意向和就具体病例对病理学检查提出的某些专门要求，为进行病理学检查和病理学诊断提供重要的参考资料或依据。

病理学检查申请单是疾病诊治过程中的有效医学文书，各项信息必须真实，应由主管患者的临床医师亲自（或指导有关医师）逐项认真填写并签名。

七、临床医师应保证送检标本与相应的病理学检查申请单内容的真实性和一致性，所送检材应具有病变代表性和可检查性，并应是标本的全部。

八、患者或患者的授权人应向医师提供有关患者的真实信息（包括姓名、性不、年龄、病史和可能涉及诊断需要的隐私信息）。

病理医师应尊重和爱护患者的隐私。

患者或患者的授权人应保证其自送检材的真实性、完整性和可检查性。

九、病理科应努力为临床、为患者提供优质服务，遵照本规范的要求加强科室建设，制订完善的科室治理制度，并实施有效的质量监控。

十、病理科工作人员应恪尽职守，做好本职工作。

病理医师应及时对标本进行检查和发出病理学诊断报告书，认真对待临床医师就病理学诊断提出的咨询，必要时应复查有关的标本和切片，并予以答复。

病理科技术人员应严格执行本规范的技术操作规程，提供合格的病理学常规染色片、专门染色片和可靠的其他相关检测结果，并确保通过技术流程处理的检材真实无误。

②不完整：减4～10分内镜咬检、穿刺标本切面数10③未达到规定面数：减5分⒉切片薄(3～5μm)，厚薄平均10①切片厚(细胞重叠)，阻碍诊断：减6～10分②厚薄不平均：减3～5分⒊切片无刀痕、裂隙、颤痕10①有刀痕、裂隙、颤痕，尚不阻碍诊断：减2分②有刀痕、裂隙、颤痕，阻碍诊断：减5分⒋切片平坦，无皱褶、折叠10①有皱褶或折叠，尚不阻碍诊断：各减2分②有皱褶折或折叠，阻碍诊断：各减5分⒌切片无污染10有污染：减10分⒍无气泡（切片与载玻片间/ 10①有气泡：减3分盖片与切片、载玻片间），②胶液外溢：减3分盖片周围无胶液外溢⒎透亮度好10①透亮度差：减1～3分②组织结构模糊：减5～7分⒏细胞核与细胞浆染色对比清晰10①细胞核着色灰淡或过蓝：减5分②红(细胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5分⒐切片无松散，裱贴位置适当 10①切片松散：减5分②切片裱贴位置不当：减5分⒑切片整洁，①切片不整洁：减3分标签端正粘牢，编号清晰10②标签粘贴不牢：减3分③编号不清晰：减4分合计100 切片质量分级标准：先将橙黄G溶于蒸馏水中，再加入无水乙醇，然后加入磷钨酸。

（4）EA36染液①EA36储备液A液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

B液：伊红0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

C液：俾士麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

②EA36工作液EA36储备液的A液 45 mlEA36储备液的B液 45 mlEA36储备液的C 液 10 ml磷钨酸0.2 g 碳酸锂饱和水溶液 1 滴 2．染色程序（1）将差不多固定的涂片置于80%乙醇中2 min。

（2）蒸馏水洗2 min。

（3）苏木素液染核10～12 min，自来水洗。

（4）盐酸-乙醇液分化约20～30s，至涂片呈淡橙红色。

（5）流水冲洗10～15min，蒸馏水洗。

（6）依次用80%、95%乙醇脱水，各2min。

（7）橙黄G6液染色3～5min。

（8）95%乙醇洗2～3次，洗去余外染液。

（9）EA36工作液染色3～5 min。

（10）95%乙醇洗2～3次，洗去余外染液。

（11）无水乙醇脱水，二甲苯透亮，中性树胶封片。

3．染色结果：细胞核呈深蓝色，核仁呈红色；不同分化类型的鳞状上皮细胞，其胞浆颜色各异：角化细胞呈粉红色，不全角化细胞呈橙黄色，角化前细胞呈淡蓝或淡绿色；红细胞呈橙红或鲜红色，白细胞的胞浆呈淡蓝绿色；粘液呈淡蓝或粉红色。

（三）瑞氏（Wright）染色瑞氏染色一样用于血液涂片，也可用于检查肿瘤细胞。

1．试剂配制（1）瑞氏染液瑞氏染料 1g甲醇600ml将瑞氏染料放入研钵内，加入适量甲醇与之混合研磨，使染料逐步溶解。

将溶解的染液倾入另一玻璃瓶内，然后再加入适量甲醇连续研磨；未溶解的染料如此反复多次，直至染料完全溶解、甲醇用完为止。

染液避光储存备用。

（2）磷酸盐缓冲液无水磷酸氢二钠 6.5g磷酸二氢钠4g蒸馏水 1 000mlpH：6.5～7.02. 染色程序（1）涂片自然干燥。

（2）滴加瑞氏液染色1min。

（2）滴加等量的磷酸缓冲液，轻轻摇荡玻片或用洗耳胶球在玻片上轻轻吹气，使两液体混合平均，连续10～15min。

（4）流水洗去染液。

（5）涂片风干后，二甲苯透亮，中性树胶封片。

3. 染色结果：胞核呈紫红色，胞浆呈紫蓝色，粘液呈粉红色或淡蓝色。

（四）May-Grünwal d-姬姆萨（Giemsa）染色May-Grünwald-姬姆萨染色适用于造血系统的细胞涂片和鉴不恶型淋巴瘤的类型。

May-Grünwald原液和姬姆萨原液配制繁琐，可直截了当购买。

1．试剂配制（1）May-Grünwald工作液May-Grünwald原液1份蒸馏水6～10份使用前配制。

（2）姬姆萨工作液姬姆萨原液1份蒸馏水6～10份使用前配制。

2．染色程序（1）涂片自然干燥，蒸馏水洗1～2min。

（2）May-Grünwald工作液染15～30min。

（3）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液，蒸馏水稍洗。

（4）姬姆萨工作液染15～30min。

（5）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液。

（6）涂片风干后，二甲苯透亮，中性树胶封片。

3．染色结果：胞核呈紫红色，胞浆和核仁呈蓝紫色。

（五）Rakoff染色Rakoff染色用于阴道细胞学涂片快速测定雌激素水平。

1．试剂配制（1）5%淡绿水溶液83ml（2）1%伊红水溶液17ml将两液混合后使用。

2．染色程序（1）用细胞刷沿阴道侧壁刷取黏膜鳞状上皮细胞，放入装有1~2ml生理盐水的试管内。

（2）在试管内滴入3滴Rakoff染液，用细胞刷在染液中轻摇混合。

（3）将1~2滴混合液滴于载玻片上，制成涂片。

（4）待涂片干燥后，用中性树胶封片。

染色结果：鳞状上皮细胞的嗜酸性和嗜碱性胞浆区分明显。

角化前细胞的核呈网状，角化细胞的固缩核呈差不多不着色的空泡状。

（六）猩红－固绿染色猩红－固绿染色用于显示性染色体。

1．试剂配制（1）猩红染液水溶性比布里西猩红 1.0g磷钨酸0.3g冰醋酸 5.0ml50%酒精100ml常备液：3%乌洛托品溶液100ml与5%的硝酸银溶液5ml充分混合。

滤色镜蓝、绿蓝、绿蓝红、蓝深绿、橙8．检查光线可达到底片的位置，确定正确的曝光时刻和进行曝光；或用自动摄影操纵台上的按键曝光。

9．记录图像的摄影日期、摄影编号、样品编号、放大倍数、内容、摄影条件和备注等。

10．将已全部摄影过的底片退回底片暗盒内，取出底片并进行暗室冲洗等后期处理。

四、电子显微镜(电镜)摄影（一）透射电镜摄影1．检查电镜工作状态，确认样本无漂移现象，选择好曝光条件。

2．调剂好灯丝像，消正像散。

3．选择视野，确定放大倍数。

4．调整物镜光阑：样品反差较强时，使用较大的物镜光阑孔，直至反差适中为止；反差小时，宜用较小的光阑孔。

5．样本聚焦在低倍电镜（＜1500倍）图像时，可采纳摇摆聚焦法用肉眼定位；样品聚焦在高倍电镜（＞1500倍）图像时，除用肉眼观看定位外，还需采纳系列拍照法：于确定焦点后，用细调钮聚焦，增加物镜电流，每调动一级最小钮拍照一张底片，总计拍照4～5张，从中选择最佳底片。

6．放平荧光屏，传送底片使之进入摄影位置。

7．调定曝光亮度和速度，然后启动快门进行曝光；曝光终止后，将底片送入储存盒内。

将底片全部摄影的储存盒取出，进行暗室冲洗等后期处理。

8．用于透射电镜摄影的底片一样为色盲片（对红光不感光），曝光时刻为2～4s，ASA［中文？］为8～25s。

（二）扫描电镜摄影1．检查电镜工作状态（1）加速电压强度的选择：取决于样品的性质、图像反差和放大倍率。

高倍观看时一样需要较高的加速电压，低倍观看时需要较低的加速电压。

（2）聚光镜电流的选择：在保证图像亮度和反差要求前提下，尽可能加大聚光镜电流，以提高照片辨论力，加大景深。

（3）物镜光阑孔的选择：关于表面结构高低差异大的样本可用较小的光阑孔，以获较大景深；低倍镜下观看时，可选用较大光阑孔，以增加视野内的信号强度。

（4）选择摄影扫描速度。

（5）视野选择：与透射电镜相同。

2．确定曝光时刻。

在扫描电镜照相机处于光关？F8或F11情形下，照片的曝光时刻在50～100s之间。

3．样品的聚焦程度要紧依靠操作人员的肉眼观看。

拍照较低放大倍数（＜1000倍）的图像，以调剂粗聚焦钮为主；拍照较高放大倍数（＞1000倍）图像，应先调剂粗聚焦钮，再调剂细聚焦钮。

4．图像消像散：①先调剂X方向旋钮，排除X方向的像散；②再调剂Y方向旋钮，排除Y方向的像散；③最后再调剂细聚焦钮，直到图像最清晰为止。