试验设计
受试物高剂量组的总剂量应能使部分 动物死亡，然后以1/5或 递减为中、 动物死亡，然后以 或1/10递减为中、低 递减为中 剂量组。 剂量组。 阳性对照组用环磷酰胺20 阳性对照组用环磷酰胺 mg/kg，腹 ， 腔注射，连续５ 每天一次。 腔注射，连续５天，每天一次。
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠， 处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹 腔，取出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中， 生理盐水的平皿中， 过滤：放入盛有约１ 生理盐水的平皿中 用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 用眼科剪剪碎附睾， 涂片： 涂片：取１小滴滤液涂片
目的
观察精子在生成过程中形态的改 变来检查受试物对雄性生殖细胞的 致突变作用. 致突变作用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制， 当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。 某些特殊的染色体重排，如性-常染色体 易位是精子产生畸形的主要机理。但是， 缺血、变态反应、感染和体温升高也可能 导致精子的畸形。
正常组 损伤对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组
正常精子
香蕉形
胖 头 阶段的生精细胞对诱变剂较 敏感，因此在染毒后3～5周时精子畸形率 最高，必要时可作动态观察有助于全面评 价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果；
各组小鼠精子畸形检测结果
组别 动物数 / 只 5 5 5 5 5 受检精子数/ 受检精子数 个 5000 5000 5000 5000 5000 畸形精子总数/ 畸形精子总数 个 51 187 259 153 69 精子畸形率 /％ ％ 1.02 3.74* 5.18* 3.06* 1.38
操作步骤
固定：干燥，甲醇固定５分钟（ 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直 接涂片镜检） 接涂片镜检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 染色： 伊红染色１小时， 镜检：干燥镜检（先用低倍镜， 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高 倍镜，在较暗的视野下观察） 倍镜，在较暗的视野下观察）
观察与计数
首先，在低倍镜下选择背景清 晰、精子分布均匀、重叠较少的区 域，然后，在高倍镜下观察结构完 整的1000个精子，计数其中畸形的 精子。
精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、 无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。 无尾精子、头部重叠的或整个与另一个 重叠的精子均不计数。 判断双头、双尾精子时，要注意与两条 精子的部分重叠相区别
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组 织残渣后再推片效果更好，注意推片的质 量； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的精 子损伤。
小鼠精子畸形实验
Sperm Abnormality Test in Mouse
•遗传学终点（genetic endpoint）：遗传学实验观察到的 现象所反应的各种事件。 •遗传学终点分类：共4类 4 1）基因突变； 3）染色体组畸变； 2）染色体畸变； DNA损伤 4）DNA DNA
1、基因突变检测 Ames试验、果蝇伴性隐性致死试验、正向基 Ames 因突变试验 2、染色体损伤检测 染色体畸变分析、微核试验、显性致死试验 3、DNA损伤检测 DNA SCE试验、UDS SCE UDS试验、SCGE SCGE试验 UDS SCGE
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水 溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小鼠 、试验动物：采用 ～ 周龄性成熟雄性小鼠
2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三 、接毒剂量及分组：受试物设高、 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。