LC-MS
◆ • • • • • • • 一.送样注意事项 1. 均匀取样: 将样品混合好再取样。 2. 送样量： 固体约为1mg 、液体约为10ul。 3. 要求样品必须澄清透明，以免损坏色谱柱； 若样品混浊,请用滤头过滤后再测样. 4. 请使用甲醇、乙腈、水、THF、DMSO、 DMF等极性溶剂溶解样品，尽量避免使用正 己烷等非极性、弱极性溶剂溶样.
• ５.样品请使用离心管或样品瓶送样。若样品 不稳定，请使用棕色送样瓶。 • ６.请按送样单的要求逐项正确完整填写。正 确填写样品编号、分子式、分子量和化学结 构；如果知道沸点请注明；若样品不稳定、 样品回收需注明。请注意，一定要填写化合 物的分子式，知道沸点的请注明沸点。 • ７所送样品如为液态，请务必注明有无剂， 所加溶剂，样品的大致浓度；并且请避免使 用与目标化合物沸点接近的溶剂；低于 100℃沸点的化合物最好不要加溶剂，请送 纯样品。 • ８．样品中不得含有超过１０％的水，以及 大量的无机酸、碱。
min
3
3.358
3.892
4
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ADC1 A, ELSD (B0902294.D) mAu 2000 1750 1500 1250 1000 750 500 0 1 2 DAD1 A, Sig=214,4 Ref=360,80 (B0902294.D) mAU 1500 1250 1000 750 500 250 0 0 1 MSD1 TIC, MS File (B0902294.D) 500000 400000 300000 200000 100000 0 0 1 2 3 4 5 6 min 2 API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 3 3 4 5 6 min
Easy-Access 界面一 按Submit键提交样品
界面三 输入样品相关信息后 Load samples
界面四 按照提示放好样品按OK确认后回到界面一查看 数据编号
PREP-HPLC
◆一. PREP-HPLC反相体系
• 通常为水-有机相(甲醇、乙腈);为获得良好的色谱 分离效果，有时会加入后处理可除去的酸、碱、盐。
• 液质联用 (liquid Chromatagraphy-Mass Spectrometry) 可提供 色谱,光谱,质谱等多种信息, • 其中在我们的报告中打印有 总离子色谱图(Total ion current chromatogram,TIC), 提取离子色谱图 (extract ion chromatogram,EIC) , 质谱棒状图(Mass spectrum)
5
5.428
F
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2
3
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4.溶剂（DMSO、THF、ETAC等）在UV214 有信号，而 在MS、ELSD上 无信号。
ADC1 A, ADC1 (10194268.D) mAu 500 480 460 440 420 400 0 1 2 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (10194268.D) mAU 2000 1500 1000
5.058 5.192 5.562
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S N
0 1 MSD1 TIC, MS File (08054103.D) 140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0 1
2 3 API-ES, Neg, Scan, Frag: 80
NHSO2 CH3
4
• 总离子色谱图TIC ---分析时间内所有扫描获得的离子 • 流强度对时间作图所得的色谱图. • 提取离子色谱图EIC—根据监测化合物分子量提取其产生 的离子 流强度对时间作图所得的色谱图. • 质谱棒状图---不同质量的离子质荷比与其相对的离子强度 所形成的谱图
三. 色谱条件:
◆酸性条件: 0.05%-0.01% TFA in ACN and H2O; gradient 10% to
4.706
4.868
3.944
4
5
5.359
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*DAD1, 0.896 (1418 mAU, - ) Ref=0.003 & 5.316 of B0902294.D mAU 1200 1000 800 600 400 200 0 220 240 260 280 300 320 340 360 380 nm
4
4.003
4.075
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5.410
250 0 0 1 2 3 MSD1 TIC, MS File (06164268.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 200000 150000 100000 50000 0 0 1 2 3 4 5 4
4.177
5
5.602
500
◆ 二.仪器的配置 LC/MS (Agilent 1100 LC , VL MS; Shimadzu 2010 A ) ESLD (SEDEX 75; PL1000 )
• • •
•
→ESLD
HPLC → DAD→
→MSD
样品先经过色谱柱的分离后进行DAD测试， 再分流两路进入ELSD和MS检测器测试。
• 1.样品中不应含有强酸及强碱以及其它对色谱柱 产生损害的物质 • 2.样品中不应含有较大量的无机盐，防止堵塞柱 子及流路。 • 3.目标化合物含量应尽可能大于20%，样品颜色 深含量低的可先过柱（薄板）后再送制备。 • 4. 送样时请附上制备前的分析图谱， • 5. 样品溶解性差、稳定性差的要对制备人员说清 楚。
×××××××××××××
三. 图谱的特殊说明
1.无机盐在ELSD上有信号,而MS,UV无信号.
ADC1 B, ELSD (06164268.D)
3.127
mAu 2500 2000 1500 1000 0 1 2 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (06164268.D) mAU 1250 1000 750 3
◆. 检测器的说明 二极管阵列检测器(Diode-Array Detector,DAD) 分析整个波长范围(190nm- 800nm)有吸收的组分,提供三维 信息(T--A) ,确定最大吸收波长. 其中在我们的报告提取波 长为214nm的色谱图.
蒸发光散射检测器(Evaporation light-scatter Detector ,ELSD)是一种质量型检测器，对所有固体物质均 有几乎相等的响应，与待测物的光学性质或电化学性质无 关,故对于没有光学吸收特征的物质可获得检测.
2.665 3.358 3.503
3
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DMSO
500 0 0 1 MSD1 TIC, MS File (10194268.D) 100000 80000 60000 40000 20000 0 0 1 2
2 API-ES, Pos, Scan, Frag: 80
3
3.491
4
4.077
5
6
4.796
四. 关于分子量的解释和注意事项
• 在画分子结构的过程中，我们发现含Cl、Br、S等有同位素 且丰度较高的化合物使用CHEMDRAW 和ISISDRAW计算 出的分子量有出入，后者计算出的分子量往往是错误的， 所以统一规定大家都用CHEMDRAW 计算分子量。
• 以C6H6NCl为例举例说明几个概念 准确分子量（Exact mass)：是用较轻同位素35Cl计算出 的分子量 平均分子量：是用同位素35Cl和37Cl自然丰度加权平均算 出的分子量 我们质谱棒状图最前面的线的质荷比就是准确分子量
4.382 4.367 5.937 0.362
4
4.254Байду номын сангаас
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400
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200000 100000 0 0 2 4
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3.不易电离的化合物，MS 出现无信号,需外送做EI；极性弱， 易挥发样品,需外送做GC-MS
ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (08054103.D) mAU 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 1 2 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (08054103.D) mAU 700 600 500 400 300 200 100 0 3 4 5
◆二. 分离纯化体系的选择应与化合物的性质相关。
• • 1.正相分离手段应作为首选纯化的办法 2.在正相系统不能分离及其极性在中等或较大的化合 物才适合用反相PREP-HPLC体系. • 3. 在甲醇、乙腈、DMF、DMSO或THF中有良好的 溶解性样品适合用反相PREP-HPLC体系.
◆三. 送样要求:
用ISISDRAW计算分子量如下
Cl Cl
N
Molecular Weight =162.02 Exact Mass =161 Molecular Formula =C6H5Cl2N Molecular Composition =C 44.48% H
3.11% Cl 43.76% N
8.65%
五. Easy-Access使用说明
6
7
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2.样品的分子量小,易挥发,ELSD出现无信号
ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (10224206.D) mAU 425 420 415 0 2 DAD1 B, Sig=214,4 Ref=360,80 (10224206.D) mAU 600 200 0 0 2 4 MSD1 TIC, MS File (10224206.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80 300000 200000 100000 0 0 2 4 MSD1 152, EIC=151:153 (10224206.D) API-ES, Pos, Scan, Frag: 80