凝集效价的判断：与相应菌液发生++凝集反应的血清最高稀释浓度为该被 检血清的凝集效价
双向琼脂扩散实验
1.材料
琼脂液，待测血清（未提供），肝癌患者AFP阳性血清（阳 性对照），生理盐水（阴性对照），AFP诊断血清（含AFP抗 体），载玻片，打孔器，毛细滴管
2.实验原理
AFP诊断血清中含有AFP的特异性抗体，肝癌患者阳性血清中含有AFP抗原作 为阳性对照，当待测血清中含有AFP抗原时，就会和AFP诊断血清中的AFP特异 性抗体发生抗原抗体反应，产生免疫沉淀线，反之则无免疫沉淀线，通过观察免 疫沉淀线的有无并和阳性对照对比，就可以判断待测血清中AFP的阳性或阴性。
Ag Ag + 生理 盐水 Ab Ag：肝癌病人AFP阳性血清 Ab：AFP诊断血清
实验结果 Ag与Ab间应出现乳白色免疫沉淀线 Ag与生理盐水间无乳白色免疫沉淀线出现
3. 实验方法
（1） 将配好的1%琼脂放到电炉子上融化，室温自然冷却 到 约60摄氏度。 （2）用玻璃吸管吸取琼脂液加入到载玻片上，使其铺满玻 片，等待其自然凝固。 （3）玻片下垫上打孔纸，用打孔器在凝固的琼脂板上打四 个相邻的孔。每两个相邻的孔不要太远，便于抗原抗体相遇。
对流免疫电泳
（4） 抗原孔内分别加入待测血清和AFP阳性血清，抗体孔 内加入AFP诊断血清和生理盐水阴性对照。 （5）将加好样的琼脂板置于电泳槽支架上，抗原孔置于负 极端，抗体孔置于正极端，琼脂板两端用纱布搭桥，使琼脂 板两端电流连通。设置电压60v，电泳40min开始电泳，电泳 结束观察结果。
Ab
Ab：AFP诊断血清
（4） 中心孔内加甲胎蛋白诊断血清，四周孔内分别加入待 测血清和肝癌患者阳性血清及生理盐水阴性对照。 （5）将琼脂版放入湿盒，置37摄氏度孵箱，24h后观察结果。
实验结果
在阳性对照与中心孔之间应出现乳白色的免疫沉淀线 阳性：待测样品孔与中心孔之间出现免疫沉淀线，且沉淀线与阳性对照 孔沉淀线相连 阴性：待测样品孔与中心孔无免疫沉淀线出现 待测样品孔与中心孔出现免疫沉淀线，且沉淀线与阳性对照孔沉淀线交 叉不判断为阳性，因为样品孔与中间孔虽然发生抗原抗体反应，产生了 免疫沉淀线，但是发生抗原抗体反应的抗原并非我们要检测的AFP抗原， 而是其它抗原与AFP抗体发生了抗原抗体反应。
3. 实验方法
（1） 取小试管8只，依次编号后，每管加入0.5ml生理盐水 （2） 吸取1﹕10 稀释伤寒沙门菌免疫血清到第1管中，洗吹3次使之充 分混匀，在吸出0.5ml加入第2管，依次对倍稀释至第7管，自第7管吸出 0.5ml弃去，第8管不加血清作为对照。 （3）吸取0.5ml H诊断菌液加入上述试管中 （4）振荡试管，使试管中液体充分混匀后放入37摄氏度 恒温箱中过夜 第 二天观察结果。
试管凝集加样程序
单位：m.5 0.5
5
0.5 0.5
6
0.5 0.5
7
0.5 0.5
8
0.5 -----
0.5 0.5
0.5 0.5 0.5 0.5
伤寒沙门 菌免疫血 清
伤寒沙门 菌菌液
0.5
0.5 0.5
1/80 1/160
0.5
1/320
0.5
1/640
0.5
0.5
0.5
对 照
对流免疫电泳
1.材料
1%离子琼脂，待测血清（未提供），肝癌患者AFP阳性血 清（阳性对照），生理盐水（阴性对照）AFP诊断血清（含 AFP抗体），载玻片，打孔器，毛细滴管，巴比妥电泳缓冲 液，电泳仪
2.实验原理
蛋白类抗原在缓冲液pH条件下带负电荷，电泳时向正极移动，抗体为球蛋白分 子量大，等电点高在缓冲液条件下仅带微弱负电荷，移动较慢，电泳时向负极移 动。电泳过程中加速抗原抗体相遇，发生抗原抗体反应，产生免疫沉淀线。
抗A ﹢ ﹣ ﹢ ﹣
抗B ﹣ ﹢ ﹢ ﹣
血型 A B AB O
试管法凝集反应
1.材料
伤寒沙门菌H诊断菌液，1﹕10伤寒沙门菌免疫血清；生理 盐水，小试管，吸管，试管架等。
2.实验原理
凝集反应是一种抗原抗体反应，当抗原与其特异性抗体相遇结合形成 抗原抗体复合物时，便可出现肉眼可见的凝集现象。所以利用这一特性便 可以鉴定未知的抗原，阳性反应强度一般用 + 的数量表示，一定条件下可 以用凝集反应做半定量测定。
3. 实验方法
（1） 取载玻片一张用笔划分为两格并编号 （2） 在两格中分别滴入抗A与抗B血清 （3）用碘伏将左手无名指消毒后，迅速用采血针扎一下采 血，将血滴入分别加入了抗A与抗B血清的方格中并用牙签混 匀 （4） 30s后观察判定实验结果
实验结果
有凝集物出现者为阳性，用+表示；无凝集物出现者为阴性用-表示。
血清稀释 1/40 液
1/1280 1/2562
实验结果
先勿振动试管，首先观察生理盐水对照管，正确的结果是观察试验管应自 第一管开始底沉淀物呈圆形，管边缘整齐；轻轻振荡，细菌分散后呈均匀混 浊，即未出现凝集现象。若出现了非特异性凝集现象。则本次实验无效。 观察试验管应自第一管开始。H菌液凝集物呈疏松棉絮状，沉于管底，轻轻 摇时即易离散和升起。根据凝集反应程度，分别以以下记号表示： ++++ 管内液体澄清，细菌完全被凝集于管底 +++ 管内液体轻度混浊，细菌大部分被凝集于管底，凝集块较小 ++ 管内液体中度混浊，仅有少量细菌凝集 + 管内液体很混浊，仅有少量细菌凝集 管内液体与对照管相同，无凝集
3. 实验方法
（1） 将配好的琼脂液放到电炉子上融化，室温自然冷却到 约60摄氏度。 （2）用玻璃吸管吸取琼脂液加入到载玻片上，使其铺满玻 片，等待其自然凝固。 （3）玻片下垫上打孔纸，用打孔器在凝固的琼脂板上打孔 周围打6个孔中间1个孔。
大家按下图打孔加样
生理盐水 Ag Ag Ag Ag Ag
Ag：肝癌病人AFP阳性血清
凝集反应与沉淀反应
一、目的要求 •了解抗原抗体反应的原理及常用技术 •掌握凝集反应、沉淀反应的概念及原理 •掌握血型鉴定凝集反应（试管法）及双向琼脂扩散 和对流免疫电泳的原理和操作技术
血型鉴定
1.材料
抗A血清，抗B血清，碘伏，载玻片，采血针，棉签，牙签
2.实验原理
血型指红细胞膜上特异性抗原的类型，在ABO血型系统中血型是根据 红细胞膜上有无A B两种特异性抗原来划分的。红细胞只含A抗原的称为A 型，只含B抗原称为B型。同时含有A B两种特异性抗原的称为AB型。A B 两种特异性抗原都不含的称为O型。因此利用抗A与抗B血清中针对A B两 种抗原的特异性抗体并通过观察抗原与抗体结合时的产生的凝集反应即可 初步判断血型