操作步骤：
1.
2.
3.
将2ml小鼠脾脏细胞悬液混匀，然后用 滴管沿盛有2ml淋巴细胞分离液的试管 壁轻轻铺于分离液面上。 将该试管置水平式离心机中1800rpm离 心15min。 用滴管小心直接插入白色絮状的细胞层， 吸出界面层细胞，移入另一试管中。
操作步骤：
4.ห้องสมุดไป่ตู้
离心后的样本各成份在试管中的分布位 置如下图：
实验五
小鼠脾单个核细胞的分离 —密度梯度离心法

原理：
根据物理学颗粒沉降原理，不同密度的颗粒在其沉降 运动中可因其比重的差别而处于不同的分布位置。利 用此原理可设计一定比重的液体界面，将小鼠脾脏中 各种不同比重的细胞通过离心沉降而达到使其彼此分 离的目的。

原理：
已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的比重为1.088左右， 而红细胞与粒细胞的比重均大于1.088。因此，若用 比重为1.088±0.001的分离液则可通过密度梯度离 心方法，在分离液界面上收集得到脾单个核细胞。
实验结果记录与分析
通过前后两次细胞计数：
单个核细胞浓度（个/ml）
四大方格细胞总数×10×2 ×103 4
一大方格=1 ×1 ×0.1=0.1mm3
1ul=1mm3
1ml=1000mm3
操作注意事项
1.
2.
3.
4.
注意分离液与稀释血的比例，一般以 1:2~1:3为宜。 分离时所取的离心速度与时间，因各台 离心机的离心半径而异，需事先通过预 试验决定。 加入稀释血时应十分小心，注意保护试 管内的界面，勿使混淆影响分离效果。 做细胞活力检查时，锥兰染色后应尽快 计数完毕，时间过长则细胞活力可能降 低。
1.088 1.088
操作步骤：



加入足量生理盐水，用滴管轻轻上下混匀，然 后1000rpm离心10min，弃去上清液，将沉淀 细胞充分摇匀，然后用生理盐水再离心洗涤1次， 弃去上清液后充分摇匀沉淀细胞。 用生理盐水稀释沉淀细胞至0.3ml（约加6滴）， 混匀。 取细胞悬液一滴加入等量白细胞稀释液于另一 试管中充分混匀，用计数板在显微镜下计数， 计算出淋巴细胞浓度（个/ml）。 检查细胞活力：取细胞悬液一滴，加入等量锥 兰溶液于另一试管中，充分混匀后立即滴一滴 细胞悬液于载玻片上，在显微镜下计数 100~200个淋巴细胞中着色的死细胞数。