变,50代以后的细胞可能发生癌变。
(5)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将
组织分散成单个细胞,以及将贴壁细胞从瓶壁上分
离下来,这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制
现象。
3.应用 (1)生产细胞产品：干扰素、疫苗、单克隆抗体。 (2)检测并判断某毒性物质毒性的大小。 (3)临床医学研究。
拓展提升 动物细胞培养与植物组织培养的比较
(2)存在问题
①成活率低
②克隆动物的健康问题
③克隆动物食品的安全性问题。
对位训练 4.下列哪项不属于体细胞核移植技术的应用 （ D ） A.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 B.保护濒危物种 C.获得组织器官异体移植的供体 D.大量产生紫杉醇
5.下列有关体细胞核移植技术的说法，不正确的是 （ A ） A.体细胞核移植技术在多种动物中获得了成功， 成功率非常高 B.克隆技术的各个环节有待于进一步改进 C.大多数克隆动物还存在一些遗传和生理缺陷类 的健康问题
冷冻（或超低温、 （5）在细胞培养过程中，通常在________________ 液氮） 条件下保存细胞。因为在这种条件下，细 胞中 酶 的活性降低，细胞 新陈代谢 的速率降低。
（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发
生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当
作 抗原 进行攻击。
考点二
动物体细胞核移植技术与克隆动物
提醒
①CO2作用——调节培养基pH;
②空气中O2作用——细胞有氧呼吸;
③所用装置——CO2培养箱。
(2)原理：细胞增殖。 (3) 动物细胞培养时 , 一般选取幼龄动物的组织、 器官,其细胞的分化程序较低,增殖能力强,有丝分 裂旺盛,容易培养。
(4)在动物细胞培养过程中,一般情况下10代以前
的细胞核型不变,10代以后有些细胞核型发生改
D.克隆动物食品的安全性问题仍然存在争议
2.2.2 动物细胞融合与 单克隆抗体
一、动物细胞融合 二、单克隆抗体
考点三
动物细胞融合与单克隆抗体
1.单克隆抗体的操作流程
2.考点解读 (1)诱导融合的2种细胞名称及作用 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)——产生抗体; 骨髓瘤细胞——无限增殖。 (2)诱导融合与原生质融合的不同方法
1.动物体细胞核移植技术操作流程
2.考点解读
(1)原理：动物细胞核的全能性(不能说动物细胞全 能性)。 (2)卵母细胞选择时期及原因减Ⅱ中期的卵母细胞, 此时具备受精能力,细胞质中合成与分裂分化有关的
物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化,形成重组
胚胎。
(3)选卵细胞做受体细胞原因
①大,易于操作；②卵黄多,营养丰富,为发育提供 充足的营养；③激发重组细胞分裂分化。 (4) 供体细胞：取供体动物的体细胞培养 ,一般选 用传代10代以内的细胞,因为10代以内的细胞一般
B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、
无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌
蛋白
D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶 处理
2.回答下列有关动物细胞培养的问题： （1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长 到细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这 种现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的 细胞层数是 单层（或一层） 。要使贴壁的细胞从瓶 胰蛋白 壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是_______ 酶。 （2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂 停止，进而出现 衰老甚至死亡 的现象；但极少数细 胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生 改变而变成 不死性 细胞，该种细胞的黏着性降低, 细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 减少 。
能保持正常的二倍体核型,保证了供体细胞正常的
遗传基础。
(5) 动物体细胞不能经培养直接发育成完整个体 ,
原因是动物体细胞的全能性受到限制。用体细胞 核移植技术能够得到克隆动物,说明动物体细胞的 细胞核具有全能性。
(6)该过程用到的技术手段：动物细胞培养、动物 细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植。 (7)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本不
（3）现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观 察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是 由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不 能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死 细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进 入死细胞内而着色）
。
（4）检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目， 最好选用细胞分裂到 中期的细胞用显微镜进行观察。
2.2.1 动物细胞培养和 核移植技术
一、动物细胞培养 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
高频考点突破
考点一 动物细胞培养技术
1.动物细胞培养的操作流程
2.考点解读 (1)培养条件
①无菌、无毒的环境——无菌处理、加抗生素杀
菌、定期更换培养液。
②营养——葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机 盐和微量元素+血清或血浆等天然成分。 ③温度和pH——(36.5±0.5)℃和(7.2～7.4)。 ④气体环境——95%空气+5%CO2。
项目 动物细胞培养 植物组织培养 相同点 都需无菌条件;都进行有丝分裂 原理 细胞的增殖 细胞的全能性 不 培养 液体培养基,动物血 固体培养基,激素及其 同 基 清及其他营养物质 他营养物质 点 获得细胞或细胞产 快速繁殖、培育无病 目的 物等 毒植株等
对位训练 1.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是( D ) A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡 过程中
动物细胞诱导融合的特有方法——灭活病毒诱导。
(3)2次筛选的目的及方法
①在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞
(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细
胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融
合的杂种细胞 ( 杂交瘤细胞 ) 才能生长。这种杂种 细胞的特点是既能迅速大量繁殖 ,又能产生单一的 特异性抗体。 ②经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所
同原因：
①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本。所以
与植物组织培养不同(只来自于一个亲本),克隆动
物遗传物质来自2个亲本。
②在发育过程中可能发生基因突变,染色体变异导
致的变异。
3.应用及存在问题
(1)应用：加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群
繁育、保护濒危物种、克隆器官用于移植等。