反应摩尔比１﹕１
标示量%=
W ×标示量
×100％
O
Cl
O Cl
O O
C
Cl
OH Cl
C HO HO C C O
N
C C HC
O
N
O
====
+
H C HO C H
OH
+
HO
CH CH2OH
OH
CH2OH
维生素C （还原型）
2,6-二氯酚靛酚 （氧化型，粉红色）
维生素C （氧化型）
2,6-二氯酚靛酚 （还原型）
2，4一二硝基苯肼分光光度法
� 原理： � 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被 氧化成脱氢抗坏血酸 � 反应式：
2，4一二硝基苯肼分光光度法
� pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古 洛糖酸 � 二酮古洛糖酸
H H O C H H O C C H H H O O C O C O C O O H
薄层扫描法
与
原理
4）线性实验 4.1）对照品溶液的配制 精密称取维生素 C标准品100mg，用缓冲溶液配 成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素 C标准溶液1、2、3、4、5ml，分 别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。 4.2）测定 用5µl定量毛细管，分别吸取上述溶液各 5 µl，点于试纸上 。 点样后晾干，并将试纸 固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。 测定△A 的积分值 (峰面积)作为纵坐标 Y ，点样量为横 坐标X，得一直线 方程 Y=15692X+130225，r= 0．9991
维生素C的结构式
O C HO HO H HO C C C C H O
维生素C：六碳的 多羟基内酯
CH2OH
测定方法
滴定法测定 维生素C
分光光度测 定维生素C
高效液相色谱法 测定维生素C
1 滴定法测定维生素 C
1.1 2，6一二氯靛酚法
1.2 微量滴定法
2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量
——差示旋光法
与
原理 方法 结果 讨论
4）稳定性试验 同一测试样品，在 120min内，每隔3min测定 一次差示旋光度。 文献结果：差示旋光度基本不变
——差示旋光法
与
原理 方法 结果 讨论
5）回收率试验 精密称取维生素 C精制品500.0mg两份，分别置于 50mL 容量瓶中，各加入 20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及 磷酸盐缓冲液配制成 50mL溶液，测定差示旋光度。 文献结果：平均回收率为 97.8％，变异系数cv为1.03％
电位滴定法
�
原理：根据滴定过程中电池
电动势的变化来确定反应终 点. Pt为指示电极，甘汞作参比 电极 E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I+k(常数)
�
�
电位滴定法
原理(具体来说:)
随着滴定剂的加入，由于发生化学反应， 待测离子浓度将不断变化； � 从而指示电极电位发生相应变化； � 导致电池电动势发生相应变化； � 计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的 突变，因此由测量工作电池电动势的变化就 能确定终点。
碘量法
�
碘的浓度由已知浓度的 Na2S2O3标准溶液标定 反应式： 计算式： Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%
� �
I 2 + 2 S 2O 3 2− = 2 I − + S 4O 6 2−
碘量法
• 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 • 原因: • (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被 氧化，在碱性介质中更甚 • (2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 • 加HAC可减少VC的副反应，避免实验 误差
原理
维生素C具有 较强还原性，可使蓝色染被 氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描 法测定含量。
薄层扫描法 操作方法与结果
（1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠 (DCP-Na)溶于无水乙醇配成 0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙 醇溶液的展开缸中浸渍 3min，边浸边摇展开缸，使 滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于 暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。
系统采用VenusilXBP—C18柱 (4．6x250 mm，5μg)，用0．2％ 的偏磷酸的水溶液作为流动相，流 速1 ml／min，检测波长240 nm； 维生素C浓度在0．1-1．0 mg／ mL范围内有良好的线性关系。该 方法回收率99．89％，标准偏差 0．91，操作简便、灵敏、可靠
薄层扫描法
2, 4一二硝基苯肼分光光度法
• 脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和 2，4－二硝 • •
基苯肼生成可溶于硫酸的脎 脎在500nm波长有最大吸收 脎的结构：
H
R
R
C C
N N
N N H
分光光度法
� 样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处 理 � 500nm处测吸光度 � 下图：721型分光光度计
钼蓝比色法
——差示旋光法
与
原理 方法 方法 结果 TEXT 讨论 TEXT
6）样品测定 取维生素 C片剂10片，称重研碎后分别用盐 酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成 50mL溶 液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测 定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其 含量。
——差示旋光法
与
原理 方法 方法 结果 TEXT 讨论 TEXT
——差示旋光法
选定pH为 2.2和6.2
——差示旋光法
与
原理 方法 结果 讨论
2）差示旋光度与溶液浓度关系 吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各 两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲 液定容；一份用 pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置 3min后, 用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光 度(△a)。 文献结果：线性方程为△a=0 205*C+ 0．05，r=0．9964
马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原 型维生素C含量的基本原理和方法。 测定波长839 nm，维生素C含量在 0．004～0．024 mg／mL范围内呈 线性关系，回收率为97．2％。该方 法简单、快速、准确。
钼蓝比色法
� 逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方
法，它是基于Folin B试剂与抗坏血酸在 pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱 氢抗坏血酸，反应产物在910 nm波长处 有最大吸光度进行定量分析。该方法的 线性范围为0～50．0μg／mL，相关系 数r=0．999 86，回收率为98．12％～ 102．15％。
� 其能还原2,6-二氯酚
OH C
OH C
靛酚染料。 � 维生素C具有还原性 的烯二醇基，我们通 过氧化还原滴定来测 定维生素C
——2，6-二氯靛酚法
原理
2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性 介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应 后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性 条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰 红色，即为终点；无需另加指示剂。
——2，6-二氯靛酚法
方法
�取本品适量（约相当于 Vc50mg），用适量水溶解，置 100ml 量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀； �精密量取稀释液适量（约相当于 Vc2mg）置50ml的锥形瓶中 , 加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫 瑰红色,并持续5s不褪； �空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二 氯靛酚滴定液滴定。 �计算： (V-V 0) ×F ×T ×W
HYPERSIL—C8色谱柱法
采用HYPERSIL—C 8色谱柱，用 0．1％低浓度的草酸作流动相，陈 昌云等采用0．05 mol／L磷酸二氢 钾缓冲液：甲醇 =80：20 (v／v)作 流动相。流速为 1．0mL／min，二 极管阵列检测器，检测波长为 254 nm。
3.2 VenusilXBP—C18柱法
概述
维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构 最简单的维生素。维生素 C有防治坏血病的功能， 所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素 C能保 持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒 作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、 蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、 柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素 C的 含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的 意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法、光 度法、高效液相色谱法等。
——差示旋光法
与
原理 方法 结果 讨论
3）辅料干扰试验 取混合辅料 20mg(淀粉、硬脂酸镁、 EDTA、糊精等按 处方比例混匀 )两份分别置于50mL的容量瓶,一份用 pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲 液定容,滤去不溶物 ,滤液在两种 pH值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素 C含量的测定不干扰。
方法
结果
讨论
薄层扫描法
与
原理 方法 方法 结果 TEXT 讨论 TEXT 5）样品的含量测定 取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的 粉末，放入 100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振 摇，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取 3ml 移 至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 µl定量毛 细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 ，然 后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素 C片中的 维生素C含量。
�
2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色， 在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。
碘量法
� 原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的
还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC � EC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535