斑马鱼胚胎整体原位免疫荧光实验第一天：
固定：收集斑马鱼胚胎于解剖显微镜下去除绒毛膜，加入4％多聚甲醛（溶于无RNA酶的PBS），4℃固定8h。

然后加入更换新鲜纯甲醇后于－20℃长期保存。

第二天：
洗涤和通透：在室温下，以25％PBST/75％甲醇、50％PBST/50％甲醇、75％PBST/25％甲醇逐级复水，每步3 min，100％PBST洗涤三次，各5 min。

用H2O洗涤1次，5 min
用丙酮通透胚胎1次，7 min（-200C）
用H2O洗涤1次，5 min
用PBST洗涤1次， 5 min
封闭：加入适量封闭液，于室温下放置1.5 h以上。

抗体孵育：更换新鲜封闭液，加入一抗（10μg/ml），置于4℃过夜。

第三天：
清洗：用洗涤液（1% BSA，1% DMSO的PBST溶液）清洗抗体8次，前7次每次15min，第8次2h。

封闭：加入适量封闭液，于室温下放置1.5 h。

抗体孵育：更换新鲜封闭液，加入二抗，置于4℃过夜。

第四天：
清洗：用洗涤液（1% BSA，1% DMSO的PBST溶液）清洗抗体8次，每次15min。

用PBST溶液洗涤胚胎2次，每次5min。