特点: 特点: (1)体细胞稳定性 (2)个体高度特异性 (3)按孟德尔遗传规律遗传 )
(二)聚合酶链式反应(PCR)技术 聚合酶链式反应(PCR)
是依赖于靶DNA序列侧翼上所结合的两个寡核 是依赖于靶DNA序列侧翼上所结合的两个寡核 DNA 苷酸引物,在体外由DNA聚合酶催化合成特异性DNA DNA聚合酶催化合成特异性 苷酸引物,在体外由DNA聚合酶催化合成特异性DNA 片段的方法,又称体外基因扩增方法,目的是从生 片段的方法,又称体外基因扩增方法, 物体的整个基因组DNA中获取足够量的特异性片段 物体的整个基因组 DNA中获取足够量的特异性片段, DNA 中获取足够量的特异性片段, 以供进一步分析. 以供进一步分析. 特点:灵敏度高,特异性中,操作简单,快速. 特点:灵敏度高,特异性中,操作简单,快速.
线粒体DNA多态性 线粒体DNA多态性→ DNA多态性 母系单亲的亲子鉴定 染色体DNA多态性→ DNA多态性 Y 染色体DNA多态性→ 父系单亲的亲子鉴定 四,亲子鉴定应具备的条件
案例: 某医院产房
梁姓夫妇
李姓夫妇
产房 内婴儿调错 11年后, 输血时发现有问题 年后, 年后 梁父 A 梁母 AB 李父 B 李母 O
第四节 亲子鉴定结果的评估 一,排除亲权关系 指分析受检者之间的遗传标记, 指分析受检者之间的遗传标记,发现不 遵循遗传规律. 遵循遗传规律.
只有1 个遗传标记违背遗传规律, 1 , 只有 1 个遗传标记违背遗传规律 , 应加测其他系统; 应加测其他系统 2 , 有 2 个遗传标记排除 , 应具体分 个遗传标记排除, 析; 个或以上遗传标记排除, 3 , 有 3 个或以上遗传标记排除 , 可 排除亲子关系; 排除亲子关系
(二)长度多态性 指由于片段插入, 指由于片段插入,缺失或重复序列数目 变异所致的DNA片段长度的个体差异. 变异所致的DNA片段长度的个体差异. DNA片段长度的个体差异 类型: 类型:散在重复序列 串联重复序列 倒位重复序列
小卫星DNA(VNTRs) ( 小卫星 ) (7-70bp) 微卫星DNA(STRs) ( 微卫星 ) (2-6bp)
需要掌握的内容: 需要掌握的内容:
名词解释:
亲子鉴定 DNA指纹 指纹 单核苷酸多态性( 单核苷酸多态性(SNP) ) 微卫星DNA(STRs) ( 微卫星 )
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四,白细胞型 指人类白细胞抗原(HLA), 又称移植抗 , 指人类白细胞抗原 原或组织相溶性抗原系统, 包括A, , , 原或组织相溶性抗原系统 , 包括 , B, C, D, DR, DQ, DP等基因产物 具有高度遗 , , , 等基因产物,具有高度遗 等基因产物 传多态性,是最复杂的人类遗传标记. 传多态性 是最复杂的人类遗传标记. 是最复杂的人类遗传标记 方法: 微是量淋巴细胞毒试验; 方法 : 微是量淋巴细胞毒试验 ; 混合淋 巴细胞培养. 巴细胞培养.
三,单亲亲子鉴定结果的评估
指只有单亲参与亲子鉴定 方法: 方法: 根据遗传标记是否违反遗传规律进行排除. 1,根据遗传标记是否违反遗传规律进行排除. 若无法排除亲权关系, 若无法排除亲权关系 , 在亲子鉴定的各位点的累 积非父排除率> 9990,计算其父权概率≥ 9990, 积非父排除率>0.9990,计算其父权概率≥0.9990, 可肯定亲子关系. 可肯定亲子关系. 利用不能参与一方的直系亲属(父母, 2,利用不能参与一方的直系亲属(父母,兄, DNA进行鉴定 进行鉴定. 妹)的DNA进行鉴定.
儿:
O
AB
第二节 基因产物水平的遗传标记 一,红细胞血型 指由等位基因决定的红细胞表面抗原的差 异,为最早用于亲子鉴定的遗传标记,有 ABO,MN,P,Rh等21个血型系统. , 个血型系统. , , 等 个血型系统
简单遗传性状,符合孟德尔遗传规律 简单遗传性状, 遗传多态性,不易受年龄,性别,疾病影响 遗传多态性,不易受年龄,性别, 操作简单,重复性好,结果明确 操作简单,重复性好,
三,DNA多态性的检测技术 DNA多态性的检测技术 fingerprint) (一)DNA指纹(DNA fingerprint)技术 DNA指纹( 指纹
将生物检材中细胞核的DNA分离出来 将生物检材中细胞核的DNA分离出来,用特定的限制 DNA分离出来, 性内切酶消化,后经电泳分离, Southern印迹转移 印迹转移, 性内切酶消化 , 后经电泳分离 , Southern 印迹转移 , 再 用已知序列小卫星DNA探针根据碱基互补原则进行杂交 用已知序列小卫星DNA探针根据碱基互补原则进行杂交, DNA探针根据碱基互补原则进行杂交, 放射自显影等技术显示出一系列 不等距离, 出一系列不等距离 用 放射自显影等技术显示 出一系列 不等距离 , 相互间隔 的多条电泳谱带组成的高度多态性图谱,实质为DNA DNA的限 的多条电泳谱带组成的高度多态性图谱,实质为DNA的限 制性片段长度多态性(RFLP)图像, 各人不同( 制性片段长度多态性 ( RFLP ) 图像 , 因 各人不同 ( 同卵 双生除外) 比对结果类似指纹,故称DNA指纹图谱. 双生除外),比对结果类似指纹,故称DNA指纹图谱. DNA指纹图谱
第十章 亲子鉴定
什么是亲子鉴定 什么是亲子鉴定 亲子鉴定的常用方法 亲子鉴定的常用方法: 亲子鉴定的常用方法 ABO血型系统 血型系统 DNA指纹 指纹
第一节 概述 亲子鉴定(identification in disputed 亲子鉴定 paternity)是指应用医学和人类学的方法 是指应用医学和人类学的方法 检测遗传标记, 检测遗传标记,并依据遗传学理论进行 分析, 分析,从而对被检者之间是否存在生物 学亲子关系所作的科学判定. 学亲子关系所作的科学判定.
PCR产物的类型及作用 PCR产物的类型及作用 (1)扩增片段序列多态性 (2)扩增片段长度多态性(AMP-FLP) 扩增片段长度多态性(AMP-FLP) 来自基因组DNA中小卫星或微卫星位 中小卫星或微卫星位 来自基因组 点.
STR是应用最广泛的遗传标记系统 是应用最广泛的遗传标记系统 扩增片段短. (1)基因位点多,多态性高,扩增片段短. 基因位点多,多态性高 扩增片段短 (2)扩增片段长度相差不大,利于进行多个 扩增片段长度相差不大, STR位点的复合扩增. STR位点的复合扩增. 位点的复合扩增 chip) (三)DNA芯片(DNA chip)技术 DNA芯片( 芯片
判定父子关系的基本原理: 判定父子关系的基本原理: 在肯定某个基因必须来自生父,而被控父亲并 在肯定某个基因必须来自生父, 不具有这个基因的情况下,可以排除亲子关系; 不具有这个基因的情况下,可以排除亲子关系;
在肯定某个基因必须来自生父,而被控父亲具 在肯定某个基因必须来自生父, 有这个基因的情况下,则不能排除其亲子关系; 有这个基因的情况下,则不能排除其亲子关系; ——父权概率 父权概率
DNA水平的遗传标记 第三节 DNA水平的遗传标记 一,DNA的结构与功能 DNA的结构与功能 二,DNA多态性的分子学基础 DNA多态性的分子学基础 (一)序列多态性 指在两条同源染色体上, 同源DNA DNA序列 指在两条同源染色体上 , 同源 DNA 序列 长度相等, 长度相等 , 但个别核苷酸不同而产生的个 体差异,也称单核苷酸多态性(SNP) 体差异,也称单核苷酸多态性(SNP). 单核苷酸多态性
二,亲子鉴定的依据 1,遗传特征的分析 遗传特征的概念 遗传标记的概念(genetic marker) 遗传标记的概念
血液细胞表面的标记 产物水平 血液蛋白质的标记 法医遗传标记 DNA水平 DNA水平 DNA序列多态性 DNA序列多态性 DNA长度多态性 DNA长度多态性
2,妊娠期限的检查(280±14天) 妊娠期限的检查(280±14天 3,性交及生育能力的鉴定 三,亲子鉴定的原理 方法: 方法:分析单基因遗传特征 原理: 原理 : 所用的遗传标记遵守孟德尔遗传 规律和终生不变. 规律和终生不变.
MN血型系统: 血型系统: 血型系统梁父 NN 儿: MN 源自母 MN 李父 MM MN 李母 NN
二,红细胞酶型 指红细胞多态性同工酶个体间的差异, 指红细胞多态性同工酶个体间的差异, 如EAP,ESD,PGM1等 EAP,ESD,PGM1 方法:电泳分离+ 方法:电泳分离+酶谱技术
三,血清蛋白型 指由等位基因决定的人血清中同一种 蛋白质的个体差异,又称血清型, 蛋白质的个体差异 , 又称血清型 , 如结合 珠蛋白型,维生素 D 结合蛋白型 , α1 一抗 珠蛋白型 , 维生素D 结合蛋白型, 胰蛋白酶型等. 胰蛋白酶型等. 方法:电泳分离+蛋白染色/ 方法:电泳分离+蛋白染色/免疫印迹 技术. 技术.
二,肯定亲权关系 指分析遗传标记未发现违背遗传规律, 指分析遗传标记未发现违背遗传规律 , 可能存在亲生关系; 可能存在亲生关系; 根据下列指标肯定亲权关系: 根据下列指标肯定亲权关系:
实验检测遗传标记的累积非父排除率 1,实验检测遗传标记的累积非父排除率 ≥99.95%; 99.95% 2 , 假定父亲的 累积父权指数 >2000 , 或 假定父亲的累积父权指数 2000, 累积父权指数> 在前概率相同条件下, 在前概率相同条件下 , 假定父亲的相对父 权机会≥99.95% 权机会≥99.95%.
一,亲子鉴定的类型 目的:为案件的审理提供证据, 目的:为案件的审理提供证据,为行政法 规的实施提供保障. 规的实施提供保障. 应用范围 1,涉及民事纠纷的亲子鉴定 , 2,涉及刑事案件的亲子鉴定 , 3,涉及行政事务的亲子鉴定 ,
类型: 类型: 父权鉴定(paternity testing), 1,父权鉴定(paternity testing), 即母子关系确定, 判断争议父亲和子女 即母子关系确定 , 间是否存在亲子关系. 间是否存在亲子关系. 2,鉴定隔代,同胞或旁系人员之间 鉴定隔代, 亲缘关系(父母不能参加检验). 亲缘关系(父母不能参加检验).