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医学-实验五巨噬细胞吞噬现象的观察


颗粒,为淀粉颗粒被吞噬后形成的吞噬体。鸡红细胞
为椭圆形、淡黄色,细胞核也为椭圆形。在显微镜下
可以观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程:有的红细
胞位于巨噬细胞的表面,有的被部分吞入,有的被完
全吞入,形成吞噬泡。有的吞噬泡体积缩小、呈圆形,
表明已与溶酶体发生融合,泡内物质正被消化分解。
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
柠檬酸钠
0.89g
柠檬酸
0.05g
氯化钠
0.42g
蒸馏水
100ml

调PH值至7.2,过滤灭菌或高压灭菌10min,置
4℃冰箱保存。
(3)0.4%台盼蓝(trypan blue)染液
台盼蓝染粉 0.4g
0.85%生理盐水 100ml
(4)6%淀粉肉汤(含台盼蓝染液)
5、每人取一张干净载玻片,滴一滴腹腔液,盖上盖玻
片,置显微镜下观察。
6、每人取一张干净载玻片,滴一滴没有注射淀粉肉汤
的腹腔液,盖上盖玻片,置显微镜下观察。
取腹腔液
观察与结果

由于细胞未经染色,因此观察时视野亮度需要适
当调低。巨噬细胞体积较大,呈圆形或者不规则形,
表面有伪足,胞质中含有数量不等、大小不一的蓝色
颗粒,因此常用该方法鉴别巨噬细胞和其他细胞。
巨噬细胞的生成
单核细胞(上)和巨噬细胞(下)
吞噬作用
吞噬作用
溶酶体的功能
巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞
巨噬细胞吞噬细菌(电镜)
实验用品
1.器材:显微镜,解剖盘,剪刀,镊子,离心机,注
射器,吸管,玻片,吸水纸。
2.材料 :小白鼠,1%鸡红细胞悬液(取无污染的鸡血
参与非特异性免疫的单核细胞进入组织后,可分化 成巨噬细胞,巨噬细胞分布广泛,由于其分布的器官 组织不同,使巨噬细胞不仅具有不同的名称,而且在 形态和功能上也表现异质性,如存在于胸腹腔的游离 巨噬细胞,脾与淋巴结中的游走和固定的巨噬细胞, 结缔组织中的组织细胞,肺泡中的尘细胞,肝组织中 的枯氏细胞、神经组织中的小胶质细胞等,这些细胞 都具有吞噬功能。
1ml,放入盛有4ml Alsever溶液瓶中,混匀置4℃冰箱 保存备用,一周内使用。使用前加入0.85%生理盐水 以1500r/min离心10min,洗涤两次,再用生理盐水配 成1%浓度悬液。
抽取静脉血
试剂
3.试剂:
(1)0.85%生理盐水
(2)Alsever溶液:
葡萄糖
2.05g
非特异性免疫功能是人类在种系进化过程中形成的由
遗传而获得的免疫防卫功能,它是先天就具备的。非 特异免疫构成机体生存必不可少的抵抗外来病原体的 第一道防线,它对病原体的识别不具有特异性,也无 记忆。
实验原理
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成,然后进入血液到达各组织内, 并进一步分化为各种巨噬细胞。他们是机体内吞噬能力最强的细 胞。单核细胞和巨噬细胞都能消灭侵入机体的细胞,吞噬异物颗 粒,消除体内衰老、损伤的细胞和变性的细胞间质、杀伤肿瘤。 当病原微生物或其它异物侵入机体时,能招引巨噬细胞,而巨噬 细胞又有趋化性,能响应招引因子的招引,产生活跃的变形运动, 主动向病原体和异物移行,在接触到病原体或异物时,即伸出伪 足,将之包围并内吞入胞质,形成吞噬体,继而细胞质中的初级 溶酶体与吞噬泡发生融合,形成吞噬性溶酶体,通过其中水解酶 等作用下,将病原体杀死,消化分解,最后将不能消化的残渣排 出细胞外。
射1%的鸡红细胞悬液1ml,轻按小白鼠腹部,使悬液 分散。
3、20min后,用颈椎脱臼法处死小白鼠(用右手抓住
鼠尾,左手拿一把剪刀或镊子按住颈椎,右手用力向 后拉即可)。
徒手抓小白鼠
给小白鼠腹腔注射给药
给小白鼠腹腔注射给药
实验步骤
4、将小白鼠置于解剖盘中,把腹部剪开一小口子,把
内脏推向一侧,用吸管吸取适量的生理盐水冲洗腹腔, 并吸取腹腔液,吸时一吸一松,以免把内脏吸出。
实验五 巨噬细胞吞噬现象的观察
实验目的
1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞
活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程及 其意义;
2、掌握小白鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死
方法。
实验原理

细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物质的方法,也
是原始防御作用。随着动物界的进化,在 大 多 数 高等动物 体 内 ,
吞噬作用不再是细胞的进食方式,而是作为防御细菌、病毒、真
菌、原生生物感染的保护机制而存在,此外,吞噬作用还能帮助
多细胞动物清高等动物体内,具有吞噬功能的细胞包括中性粒细胞、单核细
胞 或 巨 噬 细 胞 , 即 大小两类吞噬细胞,专司吞噬作用,成为非特
异性免疫功能的重要组成部分。
2、实验前一天,给小白鼠腹腔注射含台盼蓝的淀粉肉
汤的目的是什么?巨噬细胞内有哪几种结构对执行复 杂的吞噬功能最重要?
下次实验:细胞核和线粒体的分级分离
谢谢!
xiexie!
牛肉膏
0.3g
蛋白胨
1.0g
氯化钠
0.5g
蒸馏水
100ml

加热后加入可溶性淀粉6.0克,促使溶解,再煮
沸灭菌,置4℃冰箱保存。用时水浴融化,加入适量台
盼蓝染液混匀,使呈蓝色。
实验步骤
1、在实验前一天,给小白鼠腹腔注射6%的淀粉肉汤
(含台盼蓝)1ml。
2、实验时,取一只注射过淀粉肉汤的小白鼠,腹腔注
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
思考题
1、在高倍镜下绘出在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一
个(如鸡红细胞附于巨噬细胞表面、部分吞入红细胞、 吞入后形成吞噬体等),示吞噬作用的过程。


巨噬细胞是机体免疫应答的主要细胞之一,对实验动物巨噬
细胞吞噬能力的测定,是其非特异免疫能力的检测的一项重要指
标,目前本实验在病理、免疫、肿瘤学研究领域仍然广泛使用。
由于巨噬细胞含有大量的溶酶体、吞噬体和残余体,因此以台盼
蓝、卡红染料注射到实验动物体内,可以见到巨噬细胞胞质内聚
集很多蓝色、红色颗粒,而其他细胞则不摄取或仅少量摄取染料
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