新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 恒定。 缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）： 配方 1 ： 配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。 姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制： 姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分 钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越 长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。 染色步骤 （1）先用甲醇固定 2～3 分钟。 （2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。 （3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。 染液鉴定 瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是 否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。 混合染色 瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识 别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗 粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。 染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液 形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。
瑞氏染液
由酸性染料伊 缓冲液配制 染色步骤 染液鉴定 混合染色
简介 英文拼写 Wright's stain 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇 。后解离为带正电的美蓝和带
负电的伊红离子。 使用方法
瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色： 1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美 蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。 2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用： （1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中 的有色物质而着色。 甲醇 ME（瑞氏染料）----→M+ + E在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成 紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子 彼此结合的反应。 （2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞 对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。 编辑本段染液配制 (1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g 甲醇（AR） 500ml 或 600ml ○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再 行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜” 光泽，而无染料粉粒沉着。 ○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲 醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。 ○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。 (2) 缓冲液： ●缓冲液作用： ○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重