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血清蛋白(serumprotein)琼脂糖凝胶电泳
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weixin"]}};with(document)0[(getElementsBy
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ateElement('script清血清 0.2mL 中加苏丹黑染色液 0.2mL,混合置 37℃水浴中染色 30 分钟,离心约 5 分钟。以除去悬浮于血清中染料沉渣。
2、制备琼脂糖凝胶板将已配制好的 0.5%琼 脂糖凝胶于沸水浴中加热融化,用吸管吸取凝胶 溶液浇注在载玻片上,约 3mL。静置半小时后凝 固。
3、点样将剪好的滤纸条对折,以折边在距 凝胶一端 2cm 处切一点样口。将毛细管插入预染 好的血清中,待吸入部分血清后,取毛细管使其
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【注意事项】
1、电泳样品应为新鲜的空腹血清。
2、加热溶化琼脂时,须防止水份蒸发过多。 琼脂糖凝胶最好随用随制,以免凝胶表面干燥, 影响分离效果。
3、制作凝胶板时琼脂糖浓度一般选用 0.5% 左右为宜,高于 1%以上α-脂蛋白部分较 紧密,β和前β-脂蛋白部分不够清 晰;低于 4.5%则凝固性较差,图谱不清。
级,这次她有了冠冕堂皇的理由,所以木子便没有那么害羞了。书很容易借到了
有样品的一端靠于点样口端部,停靠 3 秒左右。
4、电泳将凝胶板平放入电泳槽中,使加样 端接在阴极一侧,用四层滤纸或纱布做成引桥, 敷于胶板的两端,各搭住凝胶板约 1cm 左右,引 桥的另一端浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液中。接 通电源,首先调节电流为 3-4mA/凝胶板,电泳 10-15 分钟;然后调节电流为 6-7mA/凝胶板, 电泳 30-40 分钟,即可观察到分离的区带。
示不出来。
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因 凝胶含水量大,近似自由电泳,因为固体支持物 的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于 琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一 种较好的电泳材料,分离效果较好。
血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水 溶性的脂蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂 蛋白的种类及数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也 相差很大,因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电 场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。
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5、如果需要保留电泳图谱,可将电泳后的 凝胶板放入清水中浸泡脱盐 2 小时,然后放烘箱
中烘干即可。
【试剂】
1、苏丹黑染色液将苏丹黑 B 加到无水乙醇 中至饱和,摇荡使乙酰化。用前过滤。
2、巴比妥缓冲液称取巴比妥钠 15.4g、巴比 妥 2.76g 及 EDTA0.29g,加水溶解后再加蒸馏水 至 1000mL,为电极缓冲液。
关键词:琼脂电泳血清 血清蛋白 serumprotein 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 agarosegelelectrophoresis【原理】
琼脂糖是经过挑选,以质地较纯的琼脂作为 原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂 胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基 的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电 泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多 糖,它由 D-半乳糖和 3,6-脱水-L-半乳糖的 残基交替排列组成。
级,这次她有了冠冕堂皇的理由,所以木子便没有那么害羞了。书很容易借到了
琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将 血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑进行预染。再将预 染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中,通电 后可以看到脂蛋白向正极移动,并分离出几个区 带。
正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极 到阳极依次为β-脂蛋白,前β-脂蛋 白及α-脂蛋白,在原点处应无乳糜微粒。 有时前β-脂蛋白也显示不出来。
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4、点样口要大小适宜,边缘整齐、光滑, 否则会影响电泳图谱。
5、在α-脂蛋白前若出现较浅区带, 可列为前α-脂蛋白。
【正常参考范围】
α-脂蛋白 20~30% β-脂蛋白 20~30% 前β-脂蛋白 0~28%
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琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将 血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑进行预染。再将预 染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中,通电 后可以看到脂蛋白向正极移动,并分离出几个区 带。
正常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极 到阳极依次为β-脂蛋白,前β-脂蛋 白及α-脂蛋白,在原点处应无乳糜微粒。 有时前β-脂蛋白也显
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因 凝胶含水量大,近似自由电泳,因为固体支持物 的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于 琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一 种较好的电泳材料,分离效果较好。
血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水 溶性的脂蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂 蛋白的种类及数量不同,各种脂蛋白颗粒大小也 相差很大,因此,以琼脂糖凝胶为支持物,在电 场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。
3、凝胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷 1.212g、 EDTA0.29g 及 NaCl5.85g,用蒸馏水溶解后,稀
释至 1000mL,pH 为 8.6。
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4、琼脂糖凝胶称取琼脂糖 0.45g 溶于 50mL 凝胶缓冲液中,再加水 50mL。在水浴中加热至沸, 待琼脂糖完全溶解后,立即停止加热。