小鼠免疫方案
1.将抗原蛋白溶于生理盐水中（可以溶解为0.2mg/mL的抗原溶液）；
1.1. 与等体积的弗氏完全佐剂双推法混匀（此时抗原浓度约0.1mg/mL）；
1.2 经腹部皮下多点注射免疫BALB/C小鼠(注射约0.25mL)；
1.3 2周后用等量抗原与不完全弗氏佐剂同上法混匀后免疫；
1.4 再过1周后连续每周用以上1.3.的方法加强免疫1次(抗原可减半)，共
3次；
1.4 最后一次免疫3d后，可通过断尾取血测血清效价，若达到预期目的，即
可放血收集抗血清。

2.20-100ug/mouse
3.用正常小鼠的血清做阴性对照
4.初步实验方案如下：
小鼠眼球采血500ul，将血液在37°C恒温箱中放置30分钟，再在4°C放置过夜。

用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液即为抗血清，可在-20°C保存数年。

抗血清稀释度：1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600，1：3200，1：6400，1：12800
1.抗原包被板子，10ug/ml,0.1ml/孔，4°包被过夜
2、洗涤：每孔250ul洗涤液。

洗三次。

3、封闭：每孔200ul封闭液，37摄氏度1小时。

洗涤液,封闭液和包被液均
是含0.1%吐温的PBST
4、加入抗体，按比例稀释，每孔100ul，37度1小时。

5、洗涤：同上，5次。

6、加二抗：每孔100ul，37度1小时，洗涤5次。

（这部洗涤比较关键，必
须洗干净，否则OD值偏高。

如果拍板熟练，也可以不用洗涤）
7、显色：加入底物和供氢体。

分别50ul 避光显色15min
8、终止：2mol/L硫酸50ul/孔
9、测定：用酶标仪测450nm的OD 值。