（6）基因芯片法（micro
array）又称为DNA 微探针
阵列。它是集成了大量的密 集排列的大量已知的序列探
针，通过与被标记的若干靶
核酸序列互补匹配，与芯片 特定位点上的探针杂交，利
用基因芯片杂交图象，确定
杂交探针的位置，便可根据 碱基互补匹配的原理确定靶 基因的序列。
（7） DNA序列分析对致病有关的DNA片段进 行序列测定，是诊断基因异常（已知和未知） 最直接和准确的方法。
⑷ 限制性内切酶图谱
（restriction map）：如 果DNA突变后改变了某 一核酸限制性内切酶的 识别位点，使原来某一 识别位点消失，或形成 了新的识别位点，那么 相应限制性内切酶片段 的长度和数目会发生改 变。
⑸ 限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism ,RFLP）：遗传连锁分析生物 个体间DNA的序列存在差异，据估计每100-200个 核苷酸中便有1个发生突变，这种现象称为DNA 多态性。
常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种：
⑴ 斑点杂交：DNA样品的溶液被点在滤膜上，变性、
中和、干燥固定等。标记的探针直接和滤膜上的核酸杂
交，再用放射自显影或其他方法检测杂交结果。
⑵ 等位基因特异的寡核苷酸探针（Allele-specific Oligonucleotide Probe，ASO Probe）杂交：根据点突变位
立就被广泛应用,并取得了可喜的成果。
四、基因诊断的应用 （一）感染性疾病 感染性疾病的基因诊断方法与传统的诊断方法相比，具 有高度的敏感性和特异性，且简便、快捷。目前，商品 化的诊断试剂盒，已经在病毒、细菌、支原体、衣原体
、立克次体及寄生虫感染诊断中得到了广泛应用。应用
实时在线检测反应管中的荧光信号变化进行病原体DNA 的定量，结果更为准确可靠，产物检测始终在密闭状态
（三）恶性肿瘤 从根本上说，癌症是细胞水平上的一种遗传性紊乱，是一
种基因性疾病。从正常细胞发展成癌细胞，一个基本的变化
是细胞的生长失去控制。 相对于感染性疾病及单基因遗传病来说，肿瘤的基因诊断
2.RNA诊断 RNA诊断是以mRNA为检测对象，通过对待测基因 的转录产物进行定性、定量分析，确定其剪接、加工的 缺陷及外显子的变异，以判断基因转录效率的高低，以 及转录物的大小及正常与否，从而对疾病做出诊断。
（1） RNA印迹（northern blotting）RNA印迹是检测基
因是否表达，表达产物mRNA的大小的可靠方法，根
下进行，有效地解决了产物污染这一难题。基因诊断还
可检出病毒变异或因机体免疫状态异常等原因不能测出 相应抗原和抗体的病毒感染。
1 病原体诊断 （1）病毒性感染 多种病毒性感染都可采用基因诊断检测相应的病原体，
基因诊断则可直接检测病毒本身，具有高度敏感，快速准确
等独特的优越性。 （2）细菌性感染
可应用基因诊断检测多种致病性的细菌，传统的实验室
的病原体，也能检出潜伏的病原体；既能确定既往感染
，也能确定现行感染；既能诊断普通菌株或病毒，也能 检出变异株；同时，能对那些不容易体外培养（如产毒
性大肠杆菌）和不能在实验室安全培养（如立克次体）
的病原体作出诊断，所以大大扩大了诊断范围。
三、基因诊断的方法 三十多年来，DNA诊断技术取得了飞速的发展，建 立了以核酸分子杂交、聚合酶链反应（PCR）和序列分 析为基础的多种多样的检测方法，这些检测方法可以用 于遗传疾病、肿瘤、传染性疾病等的诊断。 1. 基因诊断的常用方法
相关基因信息，对临床用药提供最佳依据。
总之，基因诊断技术在医学领域的应用已越来越被人们 所认识，它在进行传染病疫情监测病原体诊断、治疗药物选
择和疗效检测等方面具有十分重要的作用，必将为传染病的
防控和诊治做出重大贡献。
（二）遗传疾病
基因诊断本身是在分子遗传学的基础上发展起来的，
在遗传病的诊断方面成绩最为突出，也最有发展前途， 对许多已明确致病基因及其突变类型的遗传病诊断效果 良好。依据造成遗传性疾病的原因又可以将其区分成： 单一基因缺陷的遗传疾病、染色体变异所引起的遗传疾 病及由多重基因共同影响所造成的遗传疾病及线粒体基 因的变异所引起的疾病。
据杂交条带的强度，可以判断基因表达的效率。
（2）RT-PCR是一种检测基因表达产物mRNA灵敏的方
法，若与荧光定量PCR结合可对RT-PCR产物量进行准确
测定。 （3）mRNA差异显示PCR技术（DDRT-PCR）：是在转
录水平上研究基因表达差异的有效方法。该技术在分析
基因表达差异、绘制遗传图谱、分离特异性表达基因和 临床诊断遗传疾病等方面具有特殊的优势，因此一经建
诊断依赖痰涂片镜检和结核杆菌的培养与鉴定，但阳性率不 高，所需时间长。目前应用PCR技术建立诊断方法，敏感度
可达到少至100个细菌的水平，通过拷贝存在的特异性重复
序列引物，既使菌株发生变异，也能准确检出。
2 治疗过程中的检测 （1）疗效监测：以PCR和基因芯片为主的核酸分析技术能 对核酸进行定量检测和变异分析，是疗效观察最好的检测手 段。 （2）药物基因组学：每个人由于遗传背景的不同，对药物 的利用、代谢及敏感性均有差异，采用基因芯片检测病人的
二、基因诊断的原理及特点 （一）基因诊断的原理
（二）基因诊断的特点 与传统的诊断方法比较，基因诊断有以下几个特点： （1）以探测基因为目标，属于“病因诊断”，针对性强 、特异性高； （2）由于检测技术十分敏感，故诊断灵敏度相当高； （3）由于基因探针或引物可为任何来源，任何种类，所 以适应性强，诊断范围广； （4）在感染性疾病的基因诊断中，不仅可检出正在生长
点上下游核苷酸序列，合成约15-20个左右的寡核苷酸片段，
其中包含发生突变的碱基，经放射性核素或地高辛标记后 作为探针，在严格杂交条件下，只有该点突变的DNA样本，
才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形成
杂交点。
⑶ 单链构象多
态性（single
strand conformation polymorphism, SSCP）：是一 种基于单链 DNA构象差别 的点突变检测 方法。