皮肤光老化动物模型具体步骤及详细说明
•原型物种人
•来源UVA，UVB紫外导致皮肤老化
•模式动物品系SPF级ICR小鼠，健康，雄性，6~8W。

•实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

•实验周期4-6 weeks
•建模方法雄性ICR小鼠，年龄约6周。

小鼠在正常温度下（23±2℃）湿度（55%±10%）和光照（12小时光照/ 12小时黑暗，无紫外线照射）喂养。

喂养一周，等小鼠适应了环境，用8%硫化钠在小鼠的背部剃出超过2厘米x3厘米的脱毛区。

紫外照射方法：2根UVB灯管和4根UVA灯管（40W，北京电光源研究所）并列穿插安放至自制福照箱中作为紫外福照光源。

利用紫外照度仪（UV-B紫外辐照计、UV-A紫外辐照计北京师范大学光电仪器厂）测定UVA和UVB的辐射强度。

造模前，UV灯管预热10
min，待光源稳定后将实验鼠放入自制的鼠笼内（使小鼠间不能相互攀爬、站立），并放入箱照箱内，鼠笼与UV灯管相距30 cm，根据预试所得最小红斑剂量（MED）及光源强度调节福照时间，照射期间用排气
扇降低箱体温度。

第1周按1个MED的剂量进行照射，每周照射3次，往后每周照射剂量比前周递增1个MED，直至第4周4个MED为止，之后保持4个MED直至第8周实验结束。

模型组小鼠背部皮肤出现明显增厚、皱纹粗深、松弛等光老化皮肤表征，说明小鼠皮肤光老化造模成功。

MED测定方法：对预实验小鼠分别采用30mJ/cm2、60mJ/cm2、90mJ/cm2、120mJ/cm2、150mJ/cm2、180mJ/cm2的紫外福照剂量对其背部皮肤进行辐照，照射后24h观察小鼠背部皮肤出现肉眼可见红斑所需剂量为最小红斑剂量(MED)。

•应用n/a
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• 1.最小红斑剂量（MED）剂量的确定：选用2根UVB灯管和4根UVA 灯管，造模前，UV灯管预热10 min，鼠笼与UV灯管相距30 cm（此时辐照仪测的 UVA 的总辐照量是3.25 uW/cm2 左右；UVB 的总辐照量是0.134 uW/cm2 左右；这个值略有波动）。

选8只ICR小鼠，用剃毛器将小鼠背部的毛剃掉，再使用8%硫化钠将残留的毛发脱干净，然后设置4个不同辐照的时间点：分别照射10分钟、15分钟、20分钟、30分钟，每个时间点2只小鼠，到辐照时间点，取出小鼠，正常饲养，第2日观察小鼠背部的红斑情况。

辐照10
分钟和15分钟的小鼠，无明显红斑；辐照20分钟的小鼠能看到轻微的红斑，辐照30分钟的小鼠，红斑很明显。

此处选用辐照20分钟，作为预试所得最小红斑剂量（MED）
1个MED=（3.25 uW/cm2+0.134 uW/cm2）*20分钟*60=4
mJ/cm2
2.全鼠背部拍照
于第4周以及第8周取样前，拍摄全鼠背部照片，以确定是否出现光老化特征（皱纹粗深、松弛等）。

3. 免疫指标：脾脏和胸腺指标的测定
小鼠称重并执行颈椎脱位，并立即从小鼠中取出脾脏和胸腺，立即称重。

胸腺和脾脏指数根据下述方程
计算：胸腺或脾脏指数（mg/g）＝胸腺或脾脏重量/体重。

指数（TI）和脾指数（SI）可作为免疫指标。

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组织学分析
在最终紫外照射后的24h内取皮肤标本进行组织化学研究。

小鼠皮肤样
品在4%缓冲中性福尔马林溶液中固定24h，并嵌入石蜡中，连续切
片。

抗氧化指标
1. 皮肤抗氧化指标分析
取小鼠背部皮肤组织（约2厘米×3厘米，平均分为8块，一块加福尔马林固定，用于病理检测；一块加RNA later保存，-80度保存，用于测序；剩余的6块，每2块放在一个管子里面，-80度保存）。

2. 血清中抗氧化活性
实验结束时，小鼠禁食12小时，但允许自由进入水。

血液从眼球中收集到离心管中。

在离心后（7000 g，4℃,15分钟）从血液样品中获得血清，然后冷冻并储存在20℃直到分析
应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显。