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无菌检查的环境

中国药典2005年版对无菌检查环境的规定主要 有：

无菌检查应该在洁净度为10000级，局部100级的单 向流空气区域内或隔离系统内进行 无菌检查的全过程，应该遵守无菌操作，避免微生 物污染，检查的环境应该能够提供这种保障 无菌检查的单向流空气区域、工作台面和环境应该 定期验证
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样品的贮存

所有抽取的样品应尽快传递至实验室，在开检之前， 应根据样品的贮藏要求，置适宜的场所贮存。
如：注射用头孢哌酮钠
标准规定：应置冷处保存；则在开检之前样品应放置在不高于 10℃的环境中

药品检验机构对问题样品在开检之前除了在技术上 保证样品的贮存条件符合标准规定外，还应该从证 据保全的角度确保样品的安全

验证的方法


验证不符合项的处理


当温度、相对湿度和照度等指标出现不符合时，洁净室可 不必停用，但应及时修复空调系统（或更换照明装置）， 使其符合规定
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无菌检查的设备




用于无菌检查的主要仪器设备有：超净工作台、集菌 仪、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、 隔水式恒温培养箱、生化培养箱、立式冷藏柜和生物 显微镜等。 上述仪器设备中，温度设备应进行校准或验证，超净 工作台和生物安全柜应进行性能确认。校准、验证和 确认的频次通常为每年。 温度设备的校准：对培养箱、干热灭菌器等温度设备， 应进行热分布和热均匀性等指标的检定；对湿热灭菌 设备应检定安全阀、压力表等安全装置，同时应采用 生物指示剂进行有效性确认。 超净工作台和生物安全柜的性能确认：应进行洁净度 和微生物数的测定，生物安全柜还应该进行气流流型 和压差测定。

在确认以上状态要求得到满足的情况下，可以启用洁 净室。
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培养基的准备
无菌检查至少需要准备以下培养基：液体硫乙醇 酸盐培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、 营养肉汤培养基等。实验室应建立培养基配制的 标准操作规程并按规程配制上述培养基。 液体硫乙醇酸盐培养基每瓶分装略大于200ml。 改良马丁培养基每瓶分装略大于100ml。
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如何确定每个容器中的装量是否足够接种两种培养基呢？ 请看表2和表3的第2列。 如：供试品为注射液，装量为1ml，按表2第2列的规定，每 支样品接种每管培养基的最少样品量为全量，则对每支样 品而言，其装量是不够接种两种培养基的，因此，对该规 格的产品，其出厂检验最少检验数量应为40支。

以上确定的检验数量均不包括阳性对照实验的量，对于采 用薄膜过滤法的实验而言，应再增加1/2的量，上例中， 最终的一次检验用量应为60支；对于采用直接接种法的实 验而言，应再增加1支，上例中，最终的一次检验用量应 为41支。

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其他物品的采购





无菌检查还需要使用以下物品：试剂瓶及封口、消毒剂、脱脂 棉花、消毒剂缸、无菌衣、一次性手套、口罩、剪刀、镊子、 止血钳、酒精灯、一次性注射器、环境微生物采样器材和纯化 水。 试剂瓶及封口主要用于配制盛装培养基，其径高比应符合规定。 封口可以采用橡胶塞加铝盖轧口的方式，也可以采用纱布包裹 的方式。 无菌衣采用可重复使用的无纺布面料的产品。每位检验人员应 确保有1套新的无菌衣作为贮备。口罩、手套均为一次性用品， 应确保有足够的数量。 消毒剂、脱脂棉花、消毒剂缸主要用于配制盛装消毒剂，应确 保有足够的数量。常用的消毒剂有75％乙醇、1％苯扎溴铵溶 液、20％聚维酮碘溶液、3％碘酒溶液和5％石炭酸溶液。 环境微生物采样器材主要包括表面接触碟、拭子和TSA平板， 应贮备足够数量的上述产品，并确保处于有效期内。 纯化水用于培养基和消毒剂配制，应保证有足够的数量。 其他物品均为实验室常用器材，应确保有足够的数量用于无菌 检查。
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抽样
样品的代表性越强，检验结果的可信度就越高 抽样数量：检验数量的3倍 药品生产企业的抽样


生产线抽样时：不同生产时段的产品均应涉及 仓库抽样时：不同包装箱的产品均应涉及

药品检验机构的抽样


一般监督检验的样品：尽可能涉及多个包装箱 问题产品：对被控制的所有产品均应开箱检查，通过外观 检查尽可能发现有外观异常的样品，抽取作为检样
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无菌检查的外部供应
外部服务的采购 试剂、试药的采购 过滤系统的采购 其他物品的采购

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外部服务的采购

电力供应

微生物检验能耗较高，确保电力的持续供应是保证实验正 常开展和结果准确可靠的重要保障。为此，至少需要对下 列设备提供备用电力供应。 微生物检验洁净室（区），包括送风风机、排风风机、空 调和洁净室（区）内部的照明和插座用电以及高压蒸汽灭 菌器。要求市电停止供应后，能够立即无缝切换至备用电 力供应，保证设施环境和被灭菌物品的灭菌质量不被短暂 停电破坏。 冰箱、冷柜、培养箱和干燥箱。要求市电停止供应后，应 在1小时内提供备用电力供应，避免持续断电对温度控制 的较大影响。



洁净室内压力梯度的维护：每半年调试洁净室内各区域间 的压力梯度，确保正压房间对相邻房间有5Pa以上的正压， 负压房间对相邻房间有5Pa以上的负压。
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清洁维护

洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的 维护。

日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行 实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验 后。





无菌检查的定义 无菌检查的环境 无菌检查的设备 无菌检查的人员 无菌检查的外部供应 无菌检查的样品管理 无菌检查的具体步骤 无菌检查的结果保证
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无菌检查的定义
中国药典2005年版对无菌检查的定义是：无菌 检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗 器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种 方法。 由于无菌是一个相对的概念，因此，对无菌检 查的结果应该有一个正确的认识－即产品通过 无菌检查仅仅意味着在该检验条件下，供试品 未发现有微生物污染，并不表示所有的产品都 是无菌的。 反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认 为批产品的微生物污染风险相当高。



所确定的检验数量是最少量，意味着不能少于该数量，但 允许多于该数量 表1的附注应正确理解。如：批产量大于500个的注射剂， 按规定每种培养基的最少检验数量为20个包装，同时附注 指出“若每个容器中的装量不足接种两种培养基，那么表 中的检验数量应加倍”，表明当这20个包装中的内容物足 够分别接种两种培养基时，最少检验数量就是20个包装。
有级差的洁净室之间：5 200 350000 2000 100 3 200 3500 0 5 1
悬浮粒子数 （粒/m3）
≥0.5μ m ≥5μ m
浮游菌数（个/ m3） 沉降菌数（个/皿）
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验证的周期

建议每半年一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验 证次数 洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996 其他项目：参照JGJ71－90 当洁净度、微生物数、换气次数、静压差等指标出现不符 合时，应停用洁净室，对净化系统进行调整后，在重新验 证，直至符合规定才能重新启用洁净室
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检样的确定
普通样品：根据随机的原则，从抽取的样品中，确 定一次检验用量作为检样 问题样品：应优先使用外观异常的样品作为检样


检毕样品的处置

已破坏的检毕样品应根据实验室废弃物处置的规程 处理 对于问题样品，应根据上级部门的要求，保存所有 检毕样品，并确保其安全

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无菌检查的具体步骤
实验准备 人流、物流程序 消毒剂配制 环境微生物的采集 检验方法的确认 检验过程 结果观察与判断 记录

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实验准备
洁净室的启用 在检验开始前，应确保： a.洁净室净化空调系统持续运转不少于1小时，并能够 持续工作； b.洁净室持续开启紫外光灯不少于半小时； c.洁净室中有压差要求的房间之间的压差达到规定， 并能够持续保持。 d.洁净室的更衣室内有新鲜制备的用于消毒双手的消 毒剂。
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无菌检查的样品管理
检验数量的确定 抽样 样品的贮存 检样的确定 检毕样品的处置

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检验数量的确定
药品生产企业在进行产品的放行检验时，均应根据 无菌检查法中表1的规定确定检验数量；药品检验机 构在进行监督检验、委托检验时，应根据无菌检查 法中表2、表3第3列的规定确定检验数量。 需要特别指出的是：
应制订无菌采样的标准操作规程，规定抽样环境确认、人 员进入、物品进入、开包装、取样、混样、分装、记录和 样品标识等技术环节 如：抗生素无菌原料药的无菌采样 ①确定检验数量：6个容器，另加3个容器作为阳性对照 ②确定检验量：每个容器至少取1g ③确定是否需要分装：根据产品的溶解性能而定，如产品易溶于 水，则不必分装，否则应分装 ④步骤：无菌打开每个容器，从中取出至少1g，置无菌混样容器 内；混匀；根据需要，分装至适宜的无菌玻瓶中，铝盖轧口。
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洁净室的维护

系统维护

过滤器的清洗更换：每月清洗净化空调系统的新风口和初 效空气过滤器；每季度更换净化空调系统的中效过滤器； 每年更换单向流区域的高效空气过滤器，并视洁净室验证 结果，选择更换其他区域内的高效空气过滤器。 风机系统的维护：每半年检查送风风机和排风风机的各项 指标，视情况更换风机涡轮轴承。 空调系统的维护：每年夏、冬两季之初，对空调机组进行 维护，重点是压缩机保养、制冷剂补充和远程控制系统验 证。
定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净 工作室，维护的频率为每二周一次。 不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符 合的洁净室，维护的时机为出现不符合时。