Ｔｈｅ ＣＭ ＥＣｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄ ｏｆ ｐｌ ａ ｎｔ ｉ ｎｇ ｍｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｕｍ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ．Ｉ ｔ ｓ ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎｔ ｉ ｇｅ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ｏｂｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｂｙ ｉ ｍ ｍ ｕｎ ｏｃ ｙｔ ｏ ｃ ｈｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ．
ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ｏ ｗ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ ｄ ａ ｍａ ｇ ｅ ｍｏ ｄ ｅ ｌ （ Ｉ ） ， ｗｉ ｔ ｈ ｎ ｏ ｒ ｍａ ｌ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｆ ｒ ｅ ｅ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ （ Ｎ） ． Ｉ ｎ ｖ ｅ ｒ ｔ ｅ ｄ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｓ ｔ ｍｉ — ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ， Ｍ ＴＴ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｖ ｉ ｔ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ， Ａｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ —Ｆ Ｉ ＴＣ ａ ｎ ｄ Ｐ Ｉ ｄ ｏ ｕ ｂ ｌ ｅ ｍａ ｒ ｋ ｉ ｎ ｇ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｒ ａ ｔ ｅ ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｃｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｒ ａ ｔ ＣＭ ＥＣｓ ｈ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｔ ｙ ｐ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｖ ａ ｓ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ
Ｔｈ ｅ Ｆ ｉ ｒ ｓ ｔ Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ １ Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ（ Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ ０ １ １ ）
中西医结合心脑血管病杂志 ２ ０ １ ４年 １月 第 １ ２卷 第 １ 期
・ ８ ３ ・
体 外培养大 鼠心肌微血 管 内皮 细胞 缺 氧 模 型 的 建 立 Ｄ
马培 泽 ， 宋宪 波 ， 刘 宁， 姜 月华 ， 戴 国华
摘要 ： 目的 建 立 大 鼠 心 肌 微 血 管 内皮 细 胞 （ Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ ） 缺 氧 模 型 。方 法 植 块 法培 养 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ ， 免 疫 细胞 化 学 鉴 定 微 血 管 内 皮 细 胞 特 异 性 标 志 。将 原 代 培 养 的 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ 在 １ Ｏ 一 ９ ４ Ｎ 一５ ｃ ０ ｚ 低 氧 气体 环 境 中培 养 ２ ４ ｈ制 备 低 氧 损 伤 模 型 （ Ｉ 组） ， 以 无 血 清 常 氧 培 养 作 为 对 照组 （ Ｎ组） 。倒 置相 差 显微 镜 观 察 缺 氧 前 后 细胞 形 态 变化 ， ＭＴ Ｔ 法测 定 细胞 活 力 ， Ａｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ—Ｆ Ｉ ＴＣ和 Ｐ Ｉ 双 标 记 法 测 定 细 胞 凋 亡 率 。结 果 植 块 法培 养 的 大 鼠 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ具 备 典 型 微 血 管 内皮 细 胞 特 征 ； Ⅷ 因子 、 ｃ Ｄ３ １相 关 抗 原 免 疫 染 色鉴 定 均 阳 性 。 缺 氧 前 后 细 胞 形 态无 明显 变化 ； 与 Ｎ 组 比较 ， Ｌ组 细 胞 活 力 明显 增 加 （ Ｐ ＜０ ． ０ ５ ） ； 细胞凋亡 率明显降低 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 其 中早 期 凋 亡 降 低 最 明显 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。结 论 本 方 法 可 以 成 功 建 立 简 便 、 易行 的 Ｃ ＭＥ Ｃ ｓ细 胞 缺 氧 模 型 。 关键词 ： 心肌 微 血 管 内皮 细 胞 ； 缺 氧模 型 ； 细胞 活 力 ； 细 胞 凋 亡
Ｅｓ ｔ ａ ｂｌ ｉ ｓ ｈｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ｌ ｔ ｕｒ ｉ ｎｇ Ｃａ ｒ ｄｉ ａ ｃ Ｍｉ ｃ ｒ ｏｖ ａ ｓ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ Ｅｎｄ ｏ ｔ ｈｅ ｌ ｉ ａｌ Ｃｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ Ｖｉ ｔ ｒ ｏ Ｍａ Ｐｅ ｉ ｚ ｅ， Ｓ ｏ ｎｇ Ｘｉ ａ ｎｂ ｏ， Ｌｉ ｕ Ｎｉ ｎｇ， ｅ ｔ ａｌ
中图分 类号 ： Ｒ ３ ２ ９ ． ２ Ｒ ２ ８ ５ ． ５ 文献 标识码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｒ Ｌ １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ ． ２ ０ １ ４ ． Ｏ １ ． ０ ４ ６ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ — ０ ０ ８ ３ —０ ３
Ｔｈ ｅ ｏ ｒ ｉ ｇ ｉ ｎ ａ ｌ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ＣＭ ＥＣ ｓ ｉ ｎ １
Ｏ２—９ ４
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