2.实验结果分析:
内 容
有无杂 菌污染 的判断 选择培养 基的筛选 作用
现 象
对照的培养皿中无菌落 生长 培养基中菌落数偏高 菌落形态多样,菌落数偏 高 牛肉膏蛋白胨培养基上 的菌落数目大于选择培 养基上的数目
结 论
未被杂菌污染 被杂菌污染 培养基中混入其 他杂菌 选择培养基具有 筛选作用
内
容
现
尿素 _______(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源，
不选择其他两组的原因是______
其他两组都含有 __________。 NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细
菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用
(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作
筛选微生物种类
稀释倍数
4、105、106 10 _____________ 3、104、105 10 _____________
细菌
放线菌 真菌
102、103、104 _____________
(3)微生物的培养与观察。 ①连线：
形状 、大小、隆起程度和 ②观察指标：观察菌落的_____ 颜色 等方面。 _____ (4)菌种鉴定。 脲酶 能够将尿素分解成氨，使 ①原理：细菌合成的_____ 升高 。 培养基中的pH_____
以下两种统计结果。
(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数 为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？
提示：不真实。为增加实验的说服力与准确性，应设
置重复实验，在同一稀释度下涂布3个平板，统计结果
后计算平均值。
(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数 分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均 值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？ 提示：不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复
用有_________________(答出两点即可)。 为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细菌生长过程 中pH稳定
菌落 。 _____
2.对照实验设计的分析： 分析“设置对照”中的实例，探讨下列问题： (1)在A同学确定自己操作无误的情况下，A同学得出的 菌落数多于其他同学的原因可能有哪些？
提示：可能是他选择的土壤样品不同于其他同学；可
能是培养基受到了污染。
(2)如何设计对照实验帮助A同学排除上述两个可能影 响实验结果的因素： 提示：①其他同学取与A同学一样的土壤进行实验，如 果统计结果与A同学一致，则可以确定是土壤样品不同
黑色，可以此来鉴定大肠杆菌。
主题1 【互动探究】
研究培养基对微生物的选择作用
1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基：
教材P22左上方侧栏是本课题使用的培养基配方，请分
析：
(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮
源的分别是什么物质？
提示：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择 的？ 提示：该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯 一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生 长。
酚红指示剂 ，如果指示剂变红，则可 ②方法：加入___________ 以初步鉴定该细菌为尿素分解菌。
பைடு நூலகம்
【判断正误】 1.只要培养基中有尿素即可筛选出分解尿素的细菌。 (×) 【分析】只有以尿素为唯一氮源的培养基，才能筛
选出分解尿素的细菌。
2.选择培养基筛选出的微生物只有一种。
(×)
【分析】只要能利用选择培养基中特定营养物质的微 生物都可在培养基上生长，从而被一同选出。 3.对照实验可以提高实验结果的可信度。 (√)
④样品中活菌数的计算公式： (C÷V)×M 每克样品中的菌株数=__________ 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀 释倍数。
2.增加实验说服力的措施： 措施 设置重复 设置对照
培养过程中设置重 复组，同一稀释度 3 个平 方法 下应涂布__ 板，才能增加实验 的说服力与准确性 排除偶然性因素对 意义 实验结果的影响
【分析】土壤是微生物的天然培养基，在富含有机 质的土壤表层，有更多的微生物生长。
7.土壤样品稀释时不同的微生物应该选择不同的稀释 度。 (√)
【分析】土壤中不同微生物的数量不同，应该选择不 同的、合适的稀释度，以得到菌落数在30～300的平板。
8.伊红美蓝培养基可用来鉴定大肠杆菌。
(√)
【分析】大肠杆菌在伊红美蓝培养基上的菌落呈现
2.选择培养基： 特定 种类的微生物生长，同时_____ 抑制 (1)概念：允许_____ 或阻止 其他种类微生物生长的培养基。 _______ (2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基 尿素 为唯一氮源，按物理性质归类为固体 特点是以_____ 培养基。
二、进行微生物数量的测定 1.统计菌落数目： 活菌计数 法和_______________ 显微镜直接计数 法。 (1)方法：_________
360 234 23
平板3
356 287 18
提示：105的稀释度下取0.1 mL涂布的三个平板上的菌 落数在30～300，计算其平均值为(212+234+287)/3 ≈244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为 (244÷0.1)×105=2.44×108。
当两 (4)统计的菌落数比活菌的实际数目低，原因是_____ 个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个 _____________________________________________
提示：每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳
定时的记录作为结果。
【探究总结】 稀释涂布平板法的三个易错提醒 (1)稀释涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一 般以3个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均
菌落数在50个左右的最好。
(2)在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复
组。
(3)在分析结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果 是否一致，如果差别过大，则意味着操作有误，需要 重新实验。
【分析】设置对照能排除实验组中非测试因素对实验
结果的影响，使实验结果更加可信。
4.统计样品中的活菌数目一般使用平板划线法。( × )
【分析】使用平板划线法能分离微生物，但不能对 微生物进行计数。 5.显微镜直接计数法统计的都是活菌。 (×)
【分析】显微镜直接计数法统计的是活菌和死菌。
6.土壤中的微生物大多生活在富含有机质的土壤表 层。 (√)
于其他同学；
②将A同学配制的培养基在不加土样的情况下培养作为
空白对照，以判断培养基是否受到污染。
3.微生物数量测定的实验设计： (1)分离不同的微生物要采用不同的稀释度，原因是： 土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型 _______________________________________________
二者比较如下: 内 容 主要用具 计数依据 优点 直接计数法 显微镜、细菌计数板 菌株本身 计数方便、操作简单 间接计数法 培养基 培养基上菌落 数 计数的是活菌
内
容
直接计数法
间接计数法
缺点
死菌、活菌都计算 在内
操作较复杂,且有 一定误差
每毫升原液含菌株 每毫升原液含菌株 数=400×1 000×每 平均菌落数 计算公式 数= 所用涂布液的体积（mL） 小格平均菌株数× 稀释倍数① ×稀释倍数
(3)若菌落形态多样，菌落数偏高，说明培养基中混入
其他杂菌。
2.选择培养基的筛选作用：若牛肉膏蛋白胨培养基上
的菌落数目大于选择培养基上的数目，说明选择培养
基具有筛选作用。
主题2 【互动探究】 1.统计菌落数目：
进行微生物数量的测定
甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品
中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到
课题2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【自主预习】 一、研究培养基对微生物的选择作用
1.筛选菌株：
(1)自然界中目的菌株的筛选。 生存环境 的要求，到相应的 ①原理：根据目的菌对_________ 环境中去寻找。
Taq细菌 就 ②实例：能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的________ 是从热泉中筛选出来的。 (2)实验室中目的菌株的筛选。 目的菌株 生长的条件(包括营 ①原理：人为提供有利于_________ 抑制或阻止 其他微生物生长。 养、温度、pH等)，同时___________ ②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。 选择 培养基进行微生物的筛选。 ③方法：利用_____
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上
生长？
提示：分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可将尿
素分解成氨，从而为微生物提供氮源。
2.设计对照实验： (1)如何验证该选择培养基的确筛选到了能分解尿素的 细菌？ 提示：增设牛肉膏蛋白胨基础培养基并进行涂布平板
操作，如果牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于
(2)活菌计数法。 稀释涂布平板 法。 ①方法：_____________ ②原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长 样品稀释液中的一个活菌 。通 的一个菌落，来源于_______________________ 菌落数 ，就能推测出样品中大约含有 过统计平板上的_______ 多少活菌。
③活菌计数原则：在同一稀释度下涂布3个平板，并 30～300 的平板进行计数。 选择菌落数在________
选择培养基上的菌落数，则说明选择培养基的确起到
了筛选能分解尿素的细菌的作用。
(2)如何验证所用的选择培养基没有受到污染？
提示：设置一个未涂布平板的能筛选分解尿素的细菌
的选择培养基。
【探究总结】 1.培养基中有无杂菌污染的判断方法： (1)若对照的培养皿中无菌落生长，说明未被杂菌污染。 (2)若培养基中菌落数偏高，说明被杂菌污染。