（3）流动蒸汽消毒法
（4）间歇蒸汽灭菌法 应用：适用于不耐高温的营养物质的灭菌
（5）高压蒸汽灭菌法
应用最广泛，灭菌效果最好 压力—103.4KPa（1.05kg/cm2） 温度—121.3℃ 维持时间—15～20分钟
应用：适用于耐高温、耐潮湿物品的灭菌
相同温度下，湿热的灭菌效力比干热大，原因： 1、蛋白质在有水的条件下，易变性 2、湿热穿透力强 3、湿热存在潜热
3.鉴别培养基 利用细菌分解糖类 和蛋白质的能力及其代谢产物的不同， 在培养基中加入特定的底物和指示剂， 通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。
如：单糖发酵管、伊红-美蓝琼脂 培养基、克氏双糖铁琼脂等。
4.选择培养基 在培养基中加入抑制剂，抑 制标本中的杂菌生长，利于所需细菌的生长。
如： SS琼脂
麦康凯培养基
第六节 细菌的分类
一、分类原则与层次
❖ 原则：传统分类、种系分类 ❖ 层次：界、门、纲、目、科、属、种 ❖ 在细菌中常用属和种、亚种、型（噬菌体
型、血清型、生物型等）
❖ 不同来源的同一菌种的细菌称为该菌的不 同菌株（strain）
❖ 标准菌株或模式菌株：具有某种细菌典型 特征的菌株
❖ 最具权威的：《伯杰氏系统细菌学手册》
殖体（包括结核杆菌）、真菌和大多数病毒 （包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等）
含碘消毒剂：
皮肤黏膜、物体表面等
醇类消毒剂：
3、低效消毒剂 ——可杀灭多数细菌繁殖体，但不能杀灭
细菌芽胞、结核杆菌及某些抵抗力较强的真 菌和病毒 （包括季铵盐类消毒剂（新洁尔灭）、氯己定 （洗必泰）、高锰酸钾等）
皮肤黏膜、物体表面、 地面等
（二）辐射杀菌法
1、紫外线 波长：265～266nm 原理：损伤细菌DNA 特点：杀菌力强、穿透力弱
应用：适宜于室内空气消毒或不耐热物品 的表面消毒
2、电离辐射 β射线、γ射线：
适用范围：一次性医疗、卫生用品，移植物， 食品，药品，纸制品的消毒和灭菌
3、微波 波长为1～1000mm的电磁波
适用范围：食品、 非金属器械、检验室 用品、食品用具、药 杯等的消毒
大肠杆菌：葡萄糖 丙酮酸 产生其他酸类 PH≤4.5 ，甲基红指示剂呈红色（＋）
大肠杆菌（＋） 产气杆菌（－）
4、吲哚试验 培养基内蛋白质中的色氨酸
某些细菌具有色氨酸酶 分解
吲哚（靛基质）无色气体
加入吲哚试剂
形成玫瑰红色吲哚
大肠杆菌（＋） 变形杆菌（＋） 霍乱弧菌（＋） 伤寒杆菌（－）
5、硫化氢试验 培养基中的含硫氨基酸
具有抗菌作用的蛋白质 如：大肠菌素、绿脓菌素、弧菌素 6、维生素 如：大肠杆菌——B族维生素和维生素K
第四节 细菌的人工培养
一、培养基
大多数细菌生长繁殖所需要的营养物质配 制而成的基质
种 类：
液体培养基
按物理性状分为 半固体培养基
固体培养基
基础培养基
按用途分为
增菌培养基
鉴别培养基 选择培养基 特殊培养基
1.基础培养基 含有细菌基础生 长所需的基本营养成分，主要成分是 肉汤和蛋白胨。广泛用于细菌和真菌 的检验，也是制备其他培养基的基础 成分。
2.增菌培养基 在基础培养基中加入葡萄糖、血 液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌 和需要特殊生长因子的细菌生长繁殖。
如：血琼脂平板、巧克力色平板等
大肠杆菌
❖ 乳糖
⊕（产酸产气）
❖ 葡萄糖 ⊕（产酸产气）
伤寒杆菌
—（不分解）
+ （产酸不产气）
2、VP试验
葡萄糖 某些细菌分解
丙酮酸 脱羧缩合
乙酰甲基甲醇 碱性环境中氧化
二 乙 酰 培养基中精氨酸所含胍基
生成红色化合物（VP试验阳性）
大肠杆菌（－） 产气杆菌（＋）
3、 甲基红试验
产气杆菌：葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 PH＞5.4，甲基红指示剂呈橘黄色（－）
嗜温菌：生长范围(10℃~45℃) 最适温度(20℃~40℃)
嗜热菌：生长范围(25℃~95℃) 最适温度(50℃~60℃)
❖ 4. 气体：O2、CO2、其他气体 (1） O2
根据细菌对氧的要求不同将细菌分为四类： ①专性需氧菌：结核杆菌 ②微需氧菌：幽门螺杆菌 ③兼性厌氧菌：大多数病原菌 ④专性厌氧菌：破伤风杆菌
某些细菌能分解
产生硫化氢（H2S）无色气体
遇铅或亚铁离子
形成黑色的硫化铅或硫化亚铁
大肠杆菌、痢疾杆菌、 产气杆菌 （－）
变形杆菌、乙型副伤 寒杆菌 （＋）
6、枸橼酸盐利用试验 某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一的碳源，
在枸橼酸盐培养基上生长时，可将其分解为碳 酸盐，并分解铵盐生成氨，使培养基变为碱性。 指示剂溴麝香草酚兰由淡绿色变成深蓝色。
能合成，必须由外界供给的物质。 如：维生素、嘧啶、嘌呤等 少数细菌还需要特殊的生长因子
二、细菌摄取营养物质的机制（自学） 三、细菌的营养类型
1、自养菌：以简单的无机物为原料合成菌体 成分和获得能量
2、异养菌：以多种有机物为原料合成菌体成 分并获得能量
（1）腐生菌：（以动植物尸体、腐败食物等 作为营养物）
第二章 细菌的生理
第一节 细菌的理化性状
一、细菌的化学组成
水 无机盐 化合物 核酸 元素 特有成分
二、细菌的理化性状
❖ 1、光学性质
❖ 2、表面积 ❖ 3、带电现象 ❖ 4、半透性 ❖ 5、渗透压
第二节 细菌的营养与生长繁殖
一、细菌的营养物质
1、水 2、碳源 3、氮源 4、无机盐
5、生长因子 ❖ 生长因子：某些细菌生长所必需的但自身不
二、命名
❖ 拉丁双名法 ❖ 前一字为属名，用名词，大写 ❖ 后一字为种名，用形容词，小写 ❖ 中文的命名次序与拉丁文相反，是种名在前，
属名在后 ❖ 如：金黄色葡萄球菌：Staphylococcus aureus
第七节 病原微生物实验室生物安全
一、病原微生物的危害等级划分
1、第一类：能够引起人类或者动物非常严 重疾病的微生物,以及我国尚未发现或者已经 宣布消灭的微生物。
专性厌氧菌在有氧环境中不能生长的机制： 缺乏氧化还原电势高的呼吸酶—细胞色
素和细胞色素氧化酶 缺乏分解有毒氧基团的酶—超氧化物歧
化酶、触酶和过氧化物酶
（2） CO2
CO2孵箱
烛缸CO2培养法
（3）其他气体：N2， H2
❖ 5、渗透压 一般培养基的渗透压对于细菌是安全的
五、细菌的生长繁殖
（一）细菌个体的生长繁殖
光滑型菌落(smooth colony, S型菌落)
粗糙型菌落(rough colony, R型菌落)
黏液型菌落(mucoid colony, M型菌落)
三、人工培养细菌的用途
1、在医学中的应用 ①传染性疾病的诊断 例：淋病 ②细菌的鉴定与研究 ③生物制品的制备 例：卡介苗
2、在工农业生产中的应用 3、基因工程中的应用
大肠杆菌（－） 产气杆菌（＋）
7、尿素酶试验 含有尿素酶的细菌可分解培养基中的尿素
产生氨（碱性），使酚红指示剂变红。
变形杆菌（+）
大肠杆菌
产气杆菌
I（吲哚）
+
―
M（甲基红） +
―
Vi（VP试验） ―
+
C（枸橼酸盐） ―
+
常用于鉴定肠道杆菌，合称IMViC试验
❖ （二）合成代谢产物及医学上的意义
第五节 抑制或杀灭微生物的理 化因素
一、消毒灭菌的常用术语
1、消毒（disinfection）：杀死物体上病原 微生物的方法，不包括细菌的芽胞和非病原 微生物。
2、灭菌（sterilization）：杀死物体上所有 微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞在内的全 部病原微生物和非病原微生物。
3、防腐（antisepsis） 防止或抑制体外微生物生长繁殖以防止物品 腐败的各种方法。
5.特殊培养基 ：包括厌氧培养基和细菌L
型培养基等。
庖 肉 基
二、细菌在各种培养基中的生长现象
①液体培养基：沉淀；混浊；菌膜
②半固体培养基：
动力—
动力+
沿穿刺线生长 扩散生长
③固体培养基：菌苔、菌落
菌苔
菌落
菌落(colony)——由单个细菌生长繁殖所形成 的肉眼可见的细菌集落
细菌菌落类型：
❖ 为何会衰退？ 1、营养物质消耗，未得到补充 2、活菌不断产生代谢产物 3、死菌释放毒性物质
第三节 细菌的新陈代谢
❖ 分解代谢 ❖ 合成代谢
一、细菌的能量代谢（自学）
二、细菌的代谢产物
❖ （一）分解代谢产物和细菌的生化反应 1、糖发酵试验：（单糖发酵试验）
原理：各种细菌分解糖的能力及代谢产物 不同,有的产酸产气,有的只产酸不产气,有的 不分解，以此来鉴别细菌。
4、无菌（asepsis） 通过消毒灭菌物体上没有活的微生物存在。
无菌操作：防止微生物进入人体或其他物体 （手术区、超净工作柜内）的一种操作技术。
二、物理消毒灭菌法
❖ 热力 ❖ 辐射 ❖ 滤过 ❖ 干燥、低温
（一）热力灭菌法
1、干热
（1）焚烧：适 用于病理性废 弃物品或动物 尸体
（2）烧灼：适用 于微生物实验室 的接种环、试管 口、玻璃瓶盖等
（2）寄生菌：（寄生于活体内） 所有的病原菌都是异养菌，大部分属寄生菌
四、影响细菌生长的因素（细菌生长 繁殖的条件）
❖ 1. 营养物质 ❖ 2. 适宜的酸碱度
大多数病原菌的最适PH为7.2—7.6 ❖ 3. 温度
大多数细菌的最适温度为37℃
嗜冷菌：生长范围(-5℃~30 ℃) 最适温度(10℃~20℃)
1、热原质：引起发热反应
革兰阴性菌的热原质——脂多糖（内毒素） 革兰阳性菌的热原质——多糖