新生儿溶血三项检测的临床应用
新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn HDN）,系 指母、婴血型不合引起的同族免疫性溶血;已发现的人类 29个血型系统中，以ABO血型不合最常见，Rh血型不合 较少见;
有报道:
胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少,胎儿红细 胞通过胎盘进入母体血循环中刺激母体产生相应的血型抗 体（IgG）。
母基因 型OO
父基因 型AA
子基因型
AO
子血型
A
母基因 型OO
父基因 型AO
AO 或 OO A或O
ABO血型抗体
正常情况下，红细胞上缺乏A或B抗原时，血浆中 存在相应的抗体即抗A抗体或抗B抗体为天然抗体， 以IgM为主，实质是由于机体与广泛存在的类ABO 物质接触产生。
如果由于输血、怀孕或类ABO物质的刺激使 抗体浓度增加，这种免疫抗A或抗B抗体多半为IgG， 特别是O型母亲。
来自母体的抗体。 胎儿红细胞A或B抗原位点少，抗 原性弱，反应能力差。
Rh溶血病的病因和发病机制
Rh基因
编码Rh抗原的两个基因是RHD和RHCE; Rh基因系统的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e
五种，不存在d基因; RHD基因编码D抗原，RHCE基因的编码产物为C/c和
E/e，C和E一起遗传，排列为DCE；无d抗原; d表示D阴性表现型; RHD和RHCE基因编码的单倍型中最常见的有8种形 式：Dce、dce，DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和dCE。
ABO血型与抗体
ABO溶血病可发生在怀孕第一胎 自然界存在A或B血型物质如某些植物、寄生虫、伤 寒疫苗、破伤风及白喉类毒素等。 O型母亲在第一次妊娠前，已接受过A或B血型物 质的刺激，血中抗A或抗B (IgG)效价较高。 怀孕第一胎时抗体即可进入胎儿血循环引起溶血。
ABO血型不合中约20%发病 血浆及组织中存在的A和B血型物质，部分中和
致敏红细胞和血型抗体测定
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验：
又称Coombs’试验， 利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连 接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。经常 用作试验的有两类方法。 • 直接试验：是检查被检红细胞上有无已结合的不
完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。 • 间接试验：是检查血清中游离的不完全
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持 安静
Rh溶血病 红细胞缺乏D抗原称为Rh阴性，具有D抗原称为Rh阳 性，中国人绝大多数为Rh阳性。 母亲Rh阴性(无D抗原)，若胎儿Rh阳性可发生Rh溶血 病。 母亲Rh阳性(有D抗原)，但缺乏Rh系统其他抗原如E 等，若胎儿有该抗原也可发生Rh溶血病。
RhD溶血病最常见 其抗原性强弱依次为D＞E＞C＞c＞e。 RhD溶血病最常见，其次为RhE，Rhe溶血病罕见。
• 最好对阴性结果进行核实，即在该试管中再加1滴IgG致敏 红细胞如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白试剂未被 消耗，阴性结果可靠。
• 如需了解体内致敏红细胞的Ig类型，则可分别以抗IgM或 抗C3单价抗球蛋白试剂进行试验。
注意事项
• 红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反应。
• 全凝集或冷凝集血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白 试剂中含有抗转铁蛋白时，均可使红细胞发生凝集。
RhD血型不合者约5%发病
母亲对胎儿红细胞Rh抗原的敏感性不同。
临床表现
实验室检查
血型检查
母子ABO和Rh血型
溶血检查
溶血时红细胞和血红蛋白减少，早期新生儿毛细血管血 血红蛋白<145g/L可诊断为贫血;
网织红细胞增高（第一天>6%）; 血涂片有核红细胞增多（>10/100个白细胞）; 血清总胆红素和未结合胆红素明显增加;
• 试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；阳性对照 细胞[IgG抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞生理盐水悬液。 取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取压积 红细胞，加等量抗D血清，至37℃水浴致敏1小时，取出 后用生理盐水洗涤3次压积红细胞洗涤配成5%红细胞生理 盐水悬液]；阴性对照细胞（正常人5%红细胞生理盐水悬 液。取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取 压积红细胞，配成5%红细胞生理盐水悬液）。
此抗体又可通过胎盘进入胎儿血循环中导致胎儿、新生 儿体内特异性抗原抗体反应，使红细胞致敏单核-吞噬细胞 系统内破坏而溶血。
ABO溶血病的病因和发病机制
ABO血型的遗传
有A基因者称A型，有B基因者称B型，同时有A、B二 个基因者称AB型，有H基因而无A、B基因为O型 假如母“O”型，父“A”型（纯合子或杂合子）
抗体 （包括IgG类的抗A或抗B）。
抗人免疫球蛋白 自身抗体
直接Coombs试验
注意事项
• 标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使 抗体从细胞中丢失。
• 抗球蛋白试剂应按照说明最适稀释度使用，否则可产生前 带或后带现象而误认为阴性结果。
• 受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液混杂 的血清蛋白，以防止假阴性结果。
Rh溶血病一般不发生在第一胎
由于自然界无Rh血型物质
第一胎不溶血Βιβλιοθήκη 第二胎溶血初发免疫反应
胎盘 次发免疫反应
Rh溶血病发生在第一胎的情况
Rh阴性母亲既往输过Rh阳性血。 Rh阴性母亲既往有流产或人工流产史。 极少数可能是由于Rh阴性孕妇的母亲为Rh阳性，其 母怀孕时已使孕妇致敏，故第一胎发病（外祖母学 说）。
• 离心速度和时间非常重要，应取能使阳性对照管出现阳性 反应的最小离心力和最短离心时间。
注意事项
• 当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球 蛋白与不规则抗体的结合，当红细胞上抗体数量较少，可 通过反复离心、摇摆，在离心的方法，增加抗原抗体的接 触，提高阳性率。
同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
注意事项
• 如血清与相应红细胞在37 ℃水浴中致敏1小时，75%的抗 体吸附于红细胞上，如致敏2小时，则抗体吸附达95%； 如以低离子盐水溶液代替生理盐水配制5%红细胞悬液， 则致敏时间可减少至15-30分钟，但抗Fy抗体需较长的孵 育时间。
• 红细胞洗涤应迅速、彻底。要将生理盐水用力冲入管底， 使管底红细胞松散分离。要防止手上的蛋白质污染。1滴 1:4000稀释的血清可中和抗球蛋白血清1滴，导致假阳性 结果。