[结果 结果] 结果
沿穿刺线部位呈黑褐色， 沿穿刺线部位呈黑褐色， 表明有硫化氢产生， 表明有硫化氢产生，为阳性以
H2 S 试验
“+”表示， 表示， 不变色者为阴性， 不变色者为阴性，以“-”表示。 表示。 大肠杆菌：大肠杆菌： 变形杆菌： 变形杆菌：+

微生物自动鉴定分析系统
细菌分析仪是一种操作方便、快捷、自动化、 细菌分析仪是一种操作方便、快捷、自动化、标准化 是一种操作方便 程度高的微生物自动分析系统，用于临床上测定各种感染的 程度高的微生物自动分析系统，用于临床上测定各种感染的 病原体种类及其对各类抗生素的敏感性。 及其对各类抗生素的敏感性 病原体种类及其对各类抗生素的敏感性。
糖发酵试验
生 化 反 应
碳水化合物 代谢试验 碳源和氮源 利用试验 蛋白质和氨基 酸代谢试验 各种酶类试验 抑菌试验
甲基红试验 V-P试验 试验 枸橼酸盐利用试验 吲哚试验 硫化氢试验
IMViC试验 试验
一 糖发酵试验
[原理] 原理]
根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸 产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸， 产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培 养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在 养基中加入指示剂溴甲酚紫（ B.C.P指示剂， pH在 溴甲酚紫 指示剂 5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根 5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根 以下呈黄色 以上呈紫色）， 据指示剂的颜色变化来判断。是否产气， 据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培 养基中放入倒置杜氏小管观察。 养基中放入倒置杜氏小管观察。 杜氏小管观察
预 习
病原性球菌和肠道杆菌的分离 见P86-91
细菌的鉴定依据
而由于细菌的结构和形态较为简单， 而由于细菌的结构和形态较为简单，仅仅依靠形态学特征无 法准确区分。因此，需要结合细胞学 生理学、生物化学、 细胞学、 法准确区分。因此，需要结合细胞学、生理学、生物化学、 免疫学等特征，同时以抗原结构特点 遗传物质（ 以抗原结构特点、 免疫学等特征，同时以抗原结构特点、遗传物质（DNA） ） 的分子结构来阐明各种细菌间的亲缘关系， 的分子结构来阐明各种细菌间的亲缘关系，从而在分类体系 中准确地定位。 中准确地定位。
枸橼酸盐利用试验原理
培养基 枸橼酸盐 铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降 培养基 下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色 培养基变蓝
[结果 结果] 结果
深蓝色为阳性+ 深蓝色为阳性 绿色为阴性绿色为阴性
枸 橼 酸 利 用 试 验
大肠杆菌： 大肠杆菌：— 产气杆菌： 产气杆菌： +
三、硫化氢产生试验
[原理 原理] 原理
细菌生化反应
新乡医学院微生物学教研室
目的
了解生化反应的意义及常见的生化反应
细菌的生化反应
概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的 概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的 代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类， 代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这 种生化试验称为细菌的生化反应试验。 种生化试验称为细菌的生化反应试验。 意义： 鉴别细菌的重要依据。 意义：是鉴别细菌的重要依据。 的重要依据
大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 葡萄糖 乳糖 + -
二 IMViC试验
是一组试验 靛基质试验或称吲哚试验（ ）、甲基红试验（ ）、V 靛基质试验或称吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、V－ 甲基红试验 P试验（V）和枸橼酸盐利用试验（C）可缩写为IMViC试 试验（ 和枸橼酸盐利用试验（ 可缩写为IMViC试 IMViC 验，i是为了发音的需要加入的。 是为了发音的需要加入的。 常用于革兰阴性的肠道细菌检测中， 常用于革兰阴性的肠道细菌检测中，可区分产气杆菌属 和大肠杆菌属 大肠杆菌的结果是＋＋－－，产气肠杆菌的结果是－－ 大肠杆菌的结果是＋＋－－，产气肠杆菌的结果是－－ ＋＋－－，产气肠杆菌的结果是 ＋＋。
红色为阳性， 红色为阳性，+ 不出现红色为阴性， 不出现红色为阴性，-
大肠杆菌： 大肠杆菌：+ 产气杆菌： 产气杆菌：—
阳性
阴性
对照
3、V－P试验 、 － 试验
[原理 原理] 原理
产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇， 产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇， 它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰， 它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰 二乙酰 与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物， 与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP 试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。 试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。
1、靛基质试验（吲哚试验） 、靛基质试验（吲哚试验）
[原理 原理] 原理
色氨酸几乎存在于所有的蛋白质中， 色氨酸几乎存在于所有的蛋白质中，某些细菌含色氨 几乎存在于所有的蛋白质中 酸酶，能将分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质（ 酸酶，能将分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质（吲 哚）。后者与寇氏试剂中对二甲基氨基苯甲醛作用， ）。后者与寇氏试剂中对二甲基氨基苯甲醛作用， 后者与寇氏试剂中对二甲基氨基苯甲醛作用 形成红色。 形成红色。
二乙酰
培养基变红 培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后 的不同代谢途径
4、枸橼酸盐利用试验 、
[原理 原理] 原理
某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源， 某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源， 也能利用其中的铵盐作为唯一氮源， 也能利用其中的铵盐作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸 橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性， 橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性， 使指示剂呈碱性反应， 使指示剂呈碱性反应，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐 ），反之培养基不变色是为阴性 利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（ 利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（ 大肠杆菌）。 大肠杆菌）。
葡萄糖
V－P试验 － 试验
丙酮酸 乙酰甲基甲醇
V-P试剂 试剂
二乙酰 与蛋白胨培养基精氨酸中的胍基 反应生成红色化合物 培养基变红 培养基变红
[方法 方法] 方法
取出试管培养物，加入等量的李氏试剂， 取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后 不加塞，静置30分钟观察结果。 不加塞，静置30分钟观察结果。 30分钟观察结果
[方法 方法] 方法
将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中， 将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在蛋白胨水培养基中， 37℃培养24－48小时取出， 37℃培养24－48小时取出，在上述细菌的培养液内各 培养24 小时取出 加入寇氏试剂数滴，略加振摇， 加入寇氏试剂数滴，略加振摇，静止半分钟后观察结 寇氏试剂数滴 果。
2000型自动微生物药敏分析系统根据细菌生理学特 型自动微生物药敏分析系统根据细菌生理学特 点利用物化学方法鉴定细菌的类别， 点利用物化学方法鉴定细菌的类别，主要采用的试 验包括： 发酵试验、伏普（ 验包括：糖（醇）发酵试验、伏普（V-P）试验、 ）试验、 甲基红试验、七叶苷水解试验、石蕊牛乳试验、 甲基红试验、七叶苷水解试验、石蕊牛乳试验、靛 基质（吲哚）试验、硫化氢试验、 基质（吲哚）试验、硫化氢试验、明胶液化试验等 。并通过抑菌试验测定抗菌药物体外抑制细菌生长 的效力， 的效力，根据测定药物常用剂量给药时在体内能达 到的血药浓度而将细菌敏感性标准分为三级： 到的血药浓度而将细菌敏感性标准分为三级：敏感 中敏和耐药，并定出细菌的最低抑菌浓度（ 、 中敏和耐药，并定出细菌的最低抑菌浓度（MIC ），从而为临床上用药提供依据 从而为临床上用药提供依据。 ），从而为临床上用药提供依据。
[方法] 方法]
取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色， 取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色， 倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18 37℃温箱培养18－ 倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24 小时，观察结果。 小时，观察结果。
[结果] 结果]
1、确定细菌是否生长 产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色， 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+” 表示。 表示。 产酸又产气，则培养基除变黄外， 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气 表示。 泡，用“ ”表示。 不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡， 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-” 表示。 表示。
阴性
阳性
VP 试 验
大肠杆菌： 大肠杆菌：— 产气杆菌： 产气杆菌： +
[结果 结果] 结果
红色为阳性， 红色为阳性，+ 无红色为阴性， 无红色为阴性，-
甲基红试验
葡萄糖 丙酮酸 脱酸
V－P试验 － 试验
大量混合酸
乙酰甲基甲醇 V-P试剂 试剂
pH降至 以下 降至4.4以下 降至 甲基红试剂 培养基变红 培养基变红
某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、 某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、 含硫氨基酸 甲硫氨酸，而生成硫化氢。 甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐 或亚铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 或亚铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。
[方法 方法] 方法
分别穿刺接种大肠杆菌、 分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养 基中。 ℃孵育24小时后观察结果 小时后观察结果。 基中。37℃孵育 小时后观察结果。
[结果 结果] 结果
玫瑰红色
吲 哚 试 验
阳性
大肠杆菌为阳性 伤寒杆菌为阴性
+
-
2、甲基红试验 、
[原理 原理] 原理
大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸后进行混合酸发酵， 大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸后进行混合酸发酵，产生乳 培养液pH小于 酸、甲酸、乙酸、琥珀酸等多种有机酸，使培养液 小于 甲酸、乙酸、琥珀酸等多种有机酸 培养液 4.5，甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性。 ，甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性。 产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸， 产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，经脱羧后生成中性乙酰甲 基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色 指示剂呈橘黄色， 基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为 pH大于5.4 甲基红试验阴性。 甲基红试验阴性。