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2. 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的
一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
检测器：二极管阵列检测器
高效、高速、高灵敏度、高自动化
现状：超量使用，使用工业色素、染料色素
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方便、快速、准确地检测食品中合成着色 剂，是对其进行有效管理的必要手段。
测定手段（GB/T 5009.35-2003）： 1. 高效液相色谱法 2. 薄层色谱法 3. 示波极谱法 4. 其他：纸上层析、分光光度法
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亮蓝、柠檬黄、日落黄
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合成着色剂在饮料中的最大使用量
合成着色剂：用人工合成的方法从煤焦油中制取，或以苯、 甲苯、萘等芳香烃化合物为原料合成的有机色素。包括苋 菜红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、诱惑红、赤鲜红等等。
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合成着色剂的潜在危害——致泻性、致癌性
国际：JECFA制定各种合成着色剂的ADI 我国：食品安全国家标准、食品添加剂使用标 准（GB2760-2011）。
PH 4的水（70℃） 水+柠檬酸溶液，调至PH=4， 加热
调PH 洗涤
甲醇-甲酸溶液
60mL甲醇+40mL甲酸
洗涤
无水乙醇-氨水-水 70mL乙醇+20mL氨水+10mL水 解吸附
乙酸铵溶液
合成着色剂标准溶 液
1.54g乙酸铵，纯水定容至 1000mL，乙酸调PH至4
浓度0.05mg/mL
流动相 定量分析
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3. 除杂质 组装好G3漏斗，将样品倒入漏斗，抽滤； PH4的水（70℃）洗涤3次，每次20mL（洗涤沉淀物）； 甲醇-甲酸洗涤3次，每次20mL（洗涤天然色素）； 400mL PH4的水洗涤至PH为4。
4. 解吸附 更换抽滤瓶。用乙醇-氨水-水溶液洗涤三次至无色（5mL、
10mL、5mL），收集解吸液。
一个重要分支，以液体为流动相，采用高压 输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不 同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装 有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后， 进入检测器进行检测，从而实现对试样的分 析。
检测器：二极管阵列检测器
高效、高速、高灵敏度、高自动化
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高效液相色谱仪
四大系统：
1．高压输液系统（高压泵：
（GB2760-2011）
着色剂
柠檬黄 日落黄
亮蓝
最大使用量（g/kg） 0.1 0.1 0.025
同一功能的食品添加剂（相同色泽着色剂、防腐剂、 抗氧化剂）在混合使用时，各自用量占其最大使用 量的比例之和不应超过1
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一、实验原理
1.聚酰胺吸附法提取合成着色剂 聚酰胺（尼龙）通过氢键吸附着色剂，天
使流动相连续不断地送入色 谱柱）
2．进样系统（可同时进120个
样，标记每个进样孔所放的 样品）A、B泵
3．分离系统：色谱柱
4．检测系统：光电二极管阵
列检测器，一次进样可得不 同波长下的色谱图
辅助装置：
5.梯度洗脱装置等：适于分
析极性差别较大的复杂组分
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3.结果分析 保留时间（定性）：组分从进样到出现信号最大值 时的时间；根据样品中各物质被洗脱至检测器的时 间差异来进行定性分析； 峰面积（定量）：峰与峰底之间的面积，反映组分 含量；根据样品峰面积与标准品峰面积的比较来进 行定量分析。
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二、试剂与器材
试剂
配方
作用
聚酰胺粉
吸附
柠檬酸溶液
20g柠檬酸，100mL水溶解
50%乙醇 其他
定容样品
乙酸、甲醇、氨水、蒸馏水水
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二、试剂与器材
器材： 烧杯、玻棒、吸管、移液管、G3漏斗、抽滤瓶*2、 针筒、温度计、5mL玻璃离心管 电子20g，倒入50mL烧杯，碳酸饮料用电炉加热或超声 除去二氧化碳。（已脱气）。
2. 色素吸附 称取聚酰胺3g(约3平勺)，用少许PH4的水（70℃）调成糊 状，加入待测样品，搅拌5min。
然着色剂（影响测定）在酸性条件下被洗脱去 除，合成着色剂在碱性条件下被洗脱收集，浓 缩后上机测定。
吸附——洗涤——解吸附——浓缩——上机 理化测定一般步骤：除杂质、收集目标物、 调整浓度、上机
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2.1 色谱法基本原理 色谱法（又层析法）：是一种物理或物理化 学的分离分析方法。是利用混合物中各组分 在两相（固定相和流动相）中吸附、分配、 离子交换、亲和力、分子尺寸等差异，使固 定相各组分的保留作用不同，当两相做相对 运动时，不同组分产生反复多次的差速迁移 从而分离分析。
食品中合成着色剂的测定
——色素提取
2014.4.28
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课程目的：
1. 掌握食品中合成着色剂的测定原理； 2. 了解高效液相色谱的工作原理及操作方法。
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着色剂：通过使食品着色后改善其感官性状，增进食欲的 一类物质，这类食品本身具有色泽，因此又称为色素。
天然着色剂：辣椒红、甜菜红、红曲米、胭脂虫红、高粱 红、叶绿素铜钠、姜黄、栀子黄、胡萝卜素、藻蓝素、可 可色素、焦糖色素等等。
抽滤过程注意 搅拌、倒废液
70℃ PH4水，20mL，洗3次
目标物
甲醇-甲酸，20mL，洗3次 70℃ PH4水，400mL洗涤
更换抽滤瓶
直至漏斗下水滴 PH为4
直至漏斗下水滴 为无色
乙醇-氨水-水，洗三次，5ml、10mL、5mL
收集滤液，80℃水浴至2mL
清洗漏斗：自来水-盐酸-蒸馏水
乙酸调PH至6，离心管定容至5mL，4℃冰箱保存
5. 样品浓缩及保存
解吸液倒入蒸发皿中，80℃水浴蒸发至约2mL，以乙酸 （一小滴）调节PH至6。收集样品至离心管，加水定容至5mL。 4000转离心8min。标记并保存于4℃冰箱，以备下次课上机测 定。
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3g聚酰胺
20g饮料
70℃ PH4水，糊状
加热脱气
混合搅拌5min
G3漏斗抽滤
注意密 封性！
1小滴
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2.1 色谱法基本原理 色谱法（又层析法）：是一种物理或物理化 学的分离分析方法。是利用混合物中各组分 在两相（固定相和流动相）中吸附、分配、 离子交换、亲和力、分子尺寸等差异，使固 定相各组分的保留作用不同，当两相做相对 运动时，不同组分产生反复多次的差速迁移 从而分离分析。
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2. 2 高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：是色谱法的