细胞生物学的研究技术和 方法线粒体活体染色和观
察
医学细胞生物学实验
李 姣 （吴明松） 1号综合楼2-25室 TEL：8609692
E-mail: 270378076@qq.aom
细胞生物学与遗传学教研室 2014.11～2014.12
细胞生物学的研究技术和方法线粒体活
体染色和观察
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实验课要求
1. 预习；
细胞内过氧化物酶的原位显示 细胞有丝分裂的观察
设计性实验报告汇报及指导
动物细胞融合 细胞核的分离与鉴定
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第一次实验 Ⅰ 细胞生物学的研究技术和方法 Ⅱ 线粒体活体染色与观察
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I 细胞生物学的研究技术和方法
相差显微镜 phase contrast microscope 观察活细胞的微细结构和变化
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暗视野显微镜 dark field microscope
反差大、分辨力高（0. 04μm) 观察活细胞内细胞器以及液体介质中的细菌和真菌 等的存在和运动
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本学期实验教学进度安排
第一次 (验证性)
第二次 (验证性)
第三次 (验证性)
第四次 (验证性)
第五次 (设计性)
第六次 (设计性)
细胞生物学研究技术和方法 线粒体的活体观察
细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示
细胞膜的通透性观察 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
显微结构 microscopic structure 在光学显微镜下所观察到的细胞结构
亚微结构 submicroscopic structure 细胞内小于0.2μm的细微构造，通常 使用各种电子显微镜进行观察
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普通光学显微镜 light microscope，LM 最大分辨力一般为0.2μm 染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
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细胞形态结构研究技术
分辨力（率） resolution 显微镜或人眼在25cm的明视距离处能够区分相近 两点最小距离的能力。
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细胞融合技术 细胞融合 cell fusion 又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个 以上的细胞合并形成一个细胞的现象。
含有同一亲本细胞核的融合细胞 含有不同亲本细胞核的融合细胞
同核体 homokaryon
异核体 heterokaryon
2. 穿白大衣并扣好；
3. 认真操作；
4. 爱护仪器；
5. 保持卫生；
6. 保持安静。
实验室规则 1 #############。 2 #########。 3 ############。
4 ############# ######。
5 #############。
6 #########
7 #########
根据细胞内各种结构的比重和大小等不同，在同 一离心场内的沉降速度也不同的原理，用不同介 质或不同转速的离心，将细胞内各组分分级分离 出来，并进行分析的方法。
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组织匀浆
基本步骤 分级分离
差速离心 密度梯度离心
分析
用细胞化学法或生物化学的
方法分析、鉴定得到的细胞
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碱性蛋白显示
酸性蛋白显示
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I 细胞生物学的研究技术和方法
细胞形态结构研究技术
显微观察 亚显微观察
细胞的培养技术
细胞组分的分离纯化技术
分级分离技术 层析法 电泳法
细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术
组分
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差速离心
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密度梯度离心
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细胞和亚细胞组分的测定
细胞化学法 cytochemical method
在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可 与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形 成有色沉淀物（或电子密度高的物质）的原理， 对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。
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荧光显微镜 fluorescence microscope
光源——紫外线 细胞荧光化学，特别是免疫荧光技术中的重要工具， 可观察细胞或标本中的荧光现象
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透射电子显微镜 TEM
分辨力达0.08nm 观察细胞内部结构
二维平面图像
扫描电子显微镜 SEM
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实验室安全注意事项
1. 实验完成后检查水电； 2. 实验动物回收焚烧：填表责任制； 3. 了解化学试剂毒性和安全使用规则； 4. 突发情况处理及逃生，如各种原因起
火分别用关电闸、盖布、打开门窗、 报警，及其他突发情况，依次离开实 验室及大楼等。
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自然融合 人工诱导融合
物理 化学 生物
细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤 等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化 的研究开拓了一条新的途径
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细胞组分的分离纯化技术
细胞组分的分级分离 cell fractionation
分辨力一般在3nm 观察细胞（样本）表面形貌
三维立体图像
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细胞的培养技术
细胞培养 cell culture 细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体 中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生 存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长 和繁殖的方法。