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免疫分析法课件

• 甾体:通过含游离羧基的甾体衍生物与载体蛋白相连
• 抗生素:ß-内酰胺环在偏碱性条件下可以与蛋白质的自 由氨基以酰胺键的形式共价结合;氨基糖苷类抗生素 用碳化二亚胺为连接剂实现药物和载体蛋白的连接
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(2)半抗原和载体的选择原则
• 半抗原:最好含有芳香结构;应考虑抗原抗体反 应的微环境;合理利用分子类似物之间的交叉反 应。
✓ 影响因素: 抗体对相应抗原的亲合力--亲合力越高,结合越
牢固,越不易解离 环境因素对复合物的影响-pH、离子强度
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比例性和 反应阶段性
✓ 比例性:抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的 量比关系
前带(prezone):抗体过量 后带(postzone):抗原过量 等价带(equivalence zone):抗原抗体比例合适
可能会发生改变。
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• 3、药物分析中,为了得到高效价的抗血清,通 常会与蛋白质载体合成人工抗原进行试验。
• 常用载体:牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白 (OA)、破伤风类毒素(TT)、钥孔蛋白 (KLH)等。
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(1)半抗原和载体结合的化学反应
• 多肽类激素:活化蛋白质或多肽的游离羧基形成肽键; 与蛋白质或多肽的游离羧基缩合形成肽键
• 全抗原(complete antigen)
• 半抗原(hapten):只能与特异抗体作用,但不引起 机体免疫应答的分子
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2.2 药物分子的抗原性
• 1、药物分子的免疫原性 大多数的药物分子通常都是半抗原; 一些蛋白类药物、多肽类药物、激素类药物
也是完全抗原。
• 2、药物分子的抗原特异性 药物分子和蛋白质载体结合后,抗原特异性
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抗体的基本结构
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Fab:抗原结合片段 Fc:可结晶片段
➢IgG分子由四条多肽链构成,以二硫键相连,有三个功能区。
➢抗体在Fab区结合抗原分子,同时通过hi区的转动以适应不同距离的 抗原决定簇。
➢与抗原结合后,IgG分子构象改变,暴露出Fc上的活性位点,从而表
现出固定和激活补体以及粘结学单习交核流细PPT胞等亲细胞反应的功能。
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主要内容
一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用
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2.1 定义
• 抗原(antigen):指在机体中引起特异性免疫应答 反应的物质。
• 免疫原性(immunogenicity):被注射入动物体内后, 使其产生循环抗体或改变免疫细胞的反应性
• 抗原特异性(antigenic specificity):具有能与特异 抗体作用的性质
《生物药物分析》
第三章 免疫分析法
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主要内容
一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用
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பைடு நூலகம்
主要内容
一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用
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一、概述
免疫学是研究免疫系统的结构与功能,了 解其在免疫应答反应中对机体有益的防卫功能 和有害的病理损伤的机制,研究有效的免疫措 施,实现以防病,治病为目的的一门现代医学 学科。
免疫分析
标记物 有无
酶联免疫分析 非放射免疫分析
荧光免疫分析
标记免疫分析
电化学免疫分析 化学发光免疫分析
放射免疫分析(放射污染)
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免疫分析检测的发展
放射免疫检测(兴起于20世纪70年代)
酶联免疫检测(兴起于20世纪80年代, 各临床机构普遍使用);
以化学发光为代表的光生物学标记及免 疫检测技术(20世纪90年代开始推广使 用,产品步入成长期)三个阶段。
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在药物分析中,免疫分析法的 应用主要集中在以下几方面:
(1) 在实验药物动力学和临床药物学中,测定生物利用度 和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据,以 便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况;
(2) 在药物的临床检测中,对治疗指数小、超过安全剂量 易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有 交叉的药物血液浓度进行监测;
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1、抗体的结构与功能
➢抗体泛指与待测分子特异性结合的蛋 白质分子,包括免疫球蛋白 (immunoglobulin), 受体(receptor) 和其他结合蛋白质,主要是免疫球蛋 白,常用的是IgG分子 .
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免疫球蛋白的基本结构
• IgG分子基本结构是由四个肽链组成的,二条较 小的轻链和二条较大的重链,轻链与重链是由 二硫键连接形成,分为氨基端(N端),羧基 端(C端)。
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什么叫免疫分析? ➢ 基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技
术手段。抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之 间发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内, 也可以发生在体外。 ➢ 在体内发生的抗原抗体反应为体液免疫应答的效 应作用。体外的抗原抗体结合反应主要用于抗原 或抗体的检测,用于免疫学诊断。
• 载体:载体对监测系统的影响;载体效应在免疫 过程中的影响。
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(3)合成抗原的测定
• 定性测定方法:光谱分析、热力学分析 • 定量测定方法:相对含量测定;绝对含量测定。
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主要内容
一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用
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➢免疫分析实际上是一种特殊的试剂分析, 特点是抗体成为分析试剂。
(3) 在药物生产中,从发酵液或细胞培养液中快速测定有 效组分的含量,以实现对生产过程的在线监测;
(4) 对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。
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➢免疫分析:
利用抗原与抗体的特异性结合作用,来选择性识别和测定,可 以作为抗体或抗原的待测物.
➢免疫分析方法
非标记免疫分析(抗原抗体结合理化性质发生变化)
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免疫分析法的特点
特点
特异性
可逆性
比例性 反应阶段性
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特异性
✓ 特异性:抗原与抗体结合反应的专一性
✓ 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间
空间构型的互补性
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可逆性
✓ 可逆性:抗原与相应抗体结合成复合物后,在一定条 件下又可解离为游离抗原与抗体,解离后的抗原或抗 体均能保持原有的结构和活性。
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