·论著·四氯化碳综合法制备大鼠肝硬化模型叶春华 刘浔阳(中南大学湘雅三医院普外科,湖南 长沙 410013) [摘要]【目的】探讨建立一种理想的大鼠肝硬化模型的复制方法并加以评价,为下一步探索肝硬化门脉高压症治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。
【方法】90只雄性SD大鼠随机分为两组:实验组(70只)采用四氯化碳(CCl4)+苯巴比妥钠+食用白酒进行诱导,诱导期间CCl4浓度在一定范围内逐步增加,并用食用白酒替代医用乙醇溶液;对照组(20只)给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。
同时采用一系列的检查方法加以评估。
【结果】实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡率12.86%。
实验结束时,按照成模标准,造模成功大鼠共61只,均可观察到肝硬化结节及镜下假小叶形成,成模率87.14%。
实验组门静脉压力比对照组明显增高(P<0.05);血清总胆红素、谷丙转氨酶及谷草转氨酶较正常对照组明显升高(P<0.05),而血清白蛋白较之正常对照组明显降低(P<0.05)。
对照组20只全部存活。
【结论】该方法可形成稳定的肝硬化门脉高压症模型,可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。
此模型制作周期短(仅需9周),成模率高,死亡率低,具有简便、快捷、高效的优点,适于大批量制作。
[关键词] 肝硬化,实验性; 疾病模型,动物; 大鼠; 四氯化碳Study on Method of Inducing Hepatic Cirrhosis Model in Rats by Carbon Tetrachloride Y E Chun-hua, LIU X un-yang(Department o f General Surgery,the T hird X iangy a Hosp ital,CentralSouth University,Changsha,410013,China) [Abstract]【Objective】T o dev elo p and evalua te an ideal means to induce cir rhotic model in rats for nex tstudy o n live r cir rhosis with po r tal hypertension trea tment.【M ethods】N inety male SD rats we re randomly di-vided into two gr oups,T he e xperiment g roup(n=70)wa s treated with CCl4,PBS and ea table alcoho l and theco ncentra tion of CCl4and eatable alcohol were increased stage by stag e in a ce rtain range during the ex peri-ment.T he co nt rol g roup(n=20)wa s trea ted w ith common drinking w ater and animal feeds,the f requencyand do se w ere the same a s the experime nt g ro up,meanwhile evalua ted by a se ries of check methods.【Results】Af te r being induced w ith above means,the ra t mor tality of the ex periment gr oup w as12.86%,and the fo rma-tion rate of liver cir rhosis false lobe was87.14%.T he po rtal v eno us pressure of the e xperiment g roup w ashigher than the co ntrol g ro up(<0.05),ST B,G PT,G O T we re higher than the co ntro l g roup,but SA B de-crea sed(P<0.05).T he contro l g r oup w as all surv iv al.【Co nclusio n】T he pro cedure is fair ly stable and relia-ble,the model is useful for resea rch in liv er cir rhosis w ith po rtal hy pe rtension.T he cy cle time of inducing cir-rhosis model is shor t the mor ta lity is low. [Key words] liver cir rho sis,ex pe rimental; disesase models,animal; rats; carbon tetr achloride[中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7171(2005)05-0619-04 由于病毒性肝炎、酒精性肝病等原因造成的慢性肝病和肝硬化患者有增多的趋势,近十年来有关门脉高压症的研究成为消化学界的热点。
本实验通 [作者简介] 叶春华(1967-),男,湖南安乡人,博士,主治医师,主要从事肝胆外科临床工作。
[收稿日期] 2005-04-01过腹腔内注射四氯化碳(CCl4)加饮用苯巴比妥钠和食用酒精,探讨建立一种理想的肝硬化模型的方法。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物 90只Sprag ue-Daw ley鼠(简称SD大鼠),全部雄性,体重180～220g,普通大鼠饲料,均购于中南大学湘雅医学院实验动物中心。
1.1.2 动物分组 20只大鼠作为对照组,其余70只构建肝硬化门脉高压模型。
1.1.3 试剂 乙醚,75%医用酒精,10%甲醛,10%硫化钠,蒸馏水,生理盐水,肝素,CCl4(分析纯,浓度99.5%,批号XK13-001-0969-16)均购自苏州市第二化工研究所,苯巴比妥钠(0.1g/ml)购自深圳晶美生物工程有限公司。
市售食用白酒(乙醇体积分数为45%)。
1.1.4 实验准备 ①将CCl4(分析纯,浓度为99.5%)与中性菜籽油溶液混合配制成40%,50% CCl4中性菜籽油溶液(即5份CCl4+5份中性菜籽油溶液,混匀),②大鼠购回后应在新环境中适应性饲养3d后再开始实验。
大鼠喜暗,白天休息、夜间进食,食量大、对营养缺乏敏感,尤其是对维生素A 和蛋白质。
食物缺乏和供水不足的情况下会互相撕杀、啃食同类,所以食物和饮水要供应充足,一笼内饲养大鼠5只。
1.2 方法1.2.1 构建肝硬化模型 将实验大鼠分为试验组和对照组,模型制备分为两期。
诱导期和成模期。
①诱导期:实验动物在诱导前以每升蒸馏水中含0.35g苯巴比妥钠的溶液作为大鼠的惟一饮用水,时间为1周。
饲料使用普通大鼠饲料。
②成模期:实验组:按0.5m l/100g剂量予以腹腔注射40% CCl4中性菜籽油溶液,每周2次,持续4周;同时以10%乙醇溶液(由上述食用白酒加蒸馏水配制,下同)为其惟一饮用水。
第5周开始改为用50%CCl4中性菜籽油溶液,以0.5ml/100g标准腹腔注射,每周2次,持续4周;同时改为以30%乙醇溶液为其惟一饮用水至实验结束。
对照组:按0.3m l/100g体重予以腹腔注射生理盐水,每周2次,对照组给与普通饮水和饲料,频度及剂量同实验组。
制备肝硬化门脉高压症大鼠模型时间共计9周。
1.2.2 实验组成模标准 ①门静脉穿刺测压大于对照组的门脉压力区间;②以肉眼观察到肝硬化结节形成及肝脏组织切片要求能够看到假小叶的形成。
1.2.3 检测指标 成模后开腹测门静脉压力(PVP),取其血液检测肝功能:血清总蛋白(TS P)、白蛋白(SAB)、球蛋白(SG)、总胆红素(STB)、谷丙转氨酶(GPT)及血液细胞:血色素(H B)、血小板(PLT)、红细胞(RBC);肝组织送病理切片。
1.3 统计学分析方法 采用统计分析软件SPSS 10.0中文版,统计方法采用独立样本t检验。
2 结果2.1 一般情况 大体观察:大部分实验动物在诱导过程中活动减少,精神萎靡,食欲不振,每日饮水约20ml,对外界刺激反应迟钝,动物皮肤无光泽,体重下降明显。
2.2 实验组病理切片 肝内假小叶广泛形成,假小叶内可见纤维再分隔现象,同时伴有明显的肝细胞再生结节。
2.3 肝硬化模型的制作成功率及死亡率情况 实验组70只大鼠造模结束时,死亡9只,死亡原因为注射CCl4过量引起中毒所致,存活大鼠61只,死亡率12.86%。
实验结束时,按照成模标准,造模成功大鼠共为61只,成模率87.14%。
对照组20只全部存活。
2.4 两组大鼠门静脉压力变化 对此两组大鼠开腹穿刺测压结果表明:对照组(8.58±2.02)m mH g、实验组(15.72±2.76)m mH g;两组比较差异有显著性(P<0.05)。
2.5 两组大鼠血液细胞和肝功能的检测 见表1。
表1 实验组与对照组大鼠肝功能及血液细胞比较(x±s)组别TS P(g/L)S AB(g/L)S G(g/L)HB(g)RBC(×109/L)PLT(×109/L)S TB(umol/L)GPT(u/L)正常组71.17±4.2734.03±2.1736.25±2.43168.96±6.376.83±1.27802.27±79.21.25±1.4145.98±10.1试验组50.25±4.0822.51±2.1437.02±2.02140.11±5.633.7±1.32558.69±99.09.54±2.3570±27.42 P值<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05<0.05<0.05<0.053 讨论肝硬化门脉高压动物模型在探求此种疾病的病理生理,治疗等方面的重要性是不言而喻的。
实验性肝硬化模型已有较多报道,CCl4诱发肝硬化动物模型是一个较为经典的方法,染毒方法有口服、腹腔注射等,均以小动物大鼠为多。