[实验内容及步骤]



一、动物肝脏中DNA的提取 1．取猪肝8g，用匀浆器磨碎，加入相当2倍肝重的0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液，研磨三次，然后倒出匀浆物， 匀浆物在4000r/min下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液， 于4000r/min离心20min；取沉淀。 2．在上述沉淀中加入40ml0.1mol/L NaCL-0.05mol/L柠檬酸钠缓 冲液、20mlCHCl3-异戊醇混合液、4mL5%SDS使其浓度为 0.41%，振摇30min，然后缓慢加固体NaCl，使其终浓度为 1mol/L。将上述混合液在3500r/min离心20min，取上清水相。 3．在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒 慢慢搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇， 即得DNA粗制品。用蒸馏水溶解并定溶至50ml，用二苯胺法测 定DNA含量。

3．计算100g猪肝中DNA含量 ω= m1/m2 式中 ω：DNA的质量分数； m1：样液中测得的DNA的质量； m2：样液中所含样品质量。

三、实验现象及数据处理 仔细观察所得到的DNA，记录其形状、颜色。 在含量的测定时，绘制出标准曲线，查出其浓 度，并换算成质量，然后代入公式中计算出 DNA的含量。
[实验仪器及用品]


实验器材：猪肝、722型分光光度计、匀浆器、 离心机、恒温水浴锅。 实验试剂：0.1mol/l NaCL-0.05mol/l柠檬酸钠 溶液、0.015mol/L NaCL-0.0015mol/L柠檬酸 三钠溶液、95%乙醇、NaCl固体、5%SDS、 氯仿、DNA标准液、二苯胺试剂。
5 2.0
蒸馏水 /ml 二苯胺试 剂/ml
A595nm
2.0 4.0
1.6 4.0
1.2 4.0
0.8 4.0
0.4 4.0
0 4.0

样品的测定 吸取样品1.0mL，加入蒸馏水1.0ml，混匀。 然后准确加入二苯胺试剂4.0ml，混匀，于 60℃恒温水浴保温45min，冷却后，选595nm 波长，于722型分光光度计上比色测定，根据 测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。

二、DNA的定量测定（二苯胺法） 1．标准曲线的绘制 按下表加入各种试剂，混匀，于60℃恒温水浴中保温45min，冷却 后，在595nm波长下，于722型分光光度计上比色测定，以吸光度 对DNA浓度作图，绘制标准曲线。
0 标准DNA 溶液/ml 0.0
1 0.4
2 0.8
3 1.2
4 1.6
DNA的提取及含量测定
[实中提取DNA 的原理和方法； 2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理 和方法。
[实验原理]


1．DAN的提取 核酸和蛋白质在生物体中以核蛋白的形式存在，其中DNA主要存 在于细胞核中，RNA主要存在于核仁及细胞质中。动植物的 DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液 中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不 同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中 分别抽提出来。 2 DAN的含量测定 DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊 醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。在 DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比， 可用比色法测定。