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国际检验 医学杂 志 ２１ 年 ４月第 ３ ０２ ３卷第 ８期
Ｉｔ ａ ｎ ＬｂＭｅ， ｐｉ２１， １３， ｏ８ Ｊ ｄＡ ｒ ０２Ｖｏ ３Ｎ ． ｌ ．
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８７ ・ ９
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基础 实验 研 究论 著 ・
肠道 病 毒 ７ １型 的快 速 纯化 及 其鉴 定
胡 小云 ， 朱 冰△， 王长 兵 ， 邝 璐 ， 肖密丝 （ 广州 医 学院 附属 广 州 市妇女 儿童 医疗 中心 实验 室 ｓ ０ ２ ） １ １ ０
摘 要 ： 的 建 立 一 种 简单 、 速 有 效 的 从 细 胞 培 养 物 中 纯 化 肠 道 病 毒 ７ （ Ｖ７ ） 方 法 。方 法 Ｅ １病 毒 在 恒 河 猴 肾 目 快 １ Ｅ １的 Ｖ７
细胞 （Ｌ — Ｌ Ｃ ＭＫ２ 中增 殖后 ， 获 得 的 细胞 培 养 物 经反 复 冻 融 、 乙二 醇 ６０ ） 将 聚 ０ ０沉 淀 、 速 离心 、 超 氯化 铯 垫层 超 速 离心 的 方 法 纯 化 病
毒 。 用 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电泳 （Ｄ － ＡＧ ） 免 疫 印迹 （ ｅｔｒ ｌｔ和 透 射 电镜 （ Ｅ ） 方 法 对 纯 化 病 毒 进 行 鉴 定 ， 测 定 其 感 Ｓ ＳＰ Ｅ 、 ｗ ｓｅｎｂｏ） Ｔ Ｍ 的 并
染 性 的 滴度 及 回 收 率 。结 果 Ｓ Ｐ Ｄ ＡＧＥ显 示 出 ３个 条 带 ， 对 分 子 质 量 分 别 为 ３ ６ ０ 、 × １ 。 ２ ６ ０ 相 ． ×１ ３ ０ 和 ． Ｘ１ 。与 ０沉 淀 结合 氯化 铯 垫层 超 速 离心 的 方 法 比氯 化 铯 密 度 梯 度 区 带 离心 方 法 更 简 便 ， 于 操 作 ， 且 比 单 独 聚 乙 易 并 关键 词 ： 道病毒 ７ 肠 １型 ； 病 毒 纯 化 ； 超 速 离 心
Ｄ ： ０ ３ ６ ／．ｓｎ １ ７ — １ ０ ２ １ ． ８ ０ １ ＯＩ １ ． ９ ９ ｊｉ ． ６ ３４ ３ ． ０ ２ ０ ． ０ ｓ 文 献标 识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ３４ ３ （ ０ ２ ０ — ８ ７０ ｌ ７ — １ ０ ２ １ ） ８０ ９ — ２
Ｈ ｕ Ｘ ｉ ｙｕ ， ａｏ ｎ ＺｈｕＢ ｉ ｎｇ ， ａ ｇ ａｎ ｉ ｇ ， ｕａ Ｗ ｎ Ｃｈ ｇｂ ｎ Ｋ ｎｇ ， ｉ ｏＭ ｉｉ Ｌｕ Ｘ ａ ｓ （ ｎｒ Ｃｅ ｔ ａｌＬａｂ ｒ ｏ ｙ ， ｏ ａｔ ｒ Ｇｕａ ｎｇｚｈ ｕ Ｗ ｏ ｎ ａｎｄ Ｃｈ ｌ ｅ ｅ ｃ ｎ ｅ Ｇ ｕ ｇｚ ｕＭ ｅ ｃ ｌ Ｕｎ ｖ ｒ ｉｙ ， ｏ ｍｅ ｉｄｒ ｎ ｓＭ ｄｉａｌＣｅ ｔ ｒ， ａｎ ｈｏ ｄｉ ａ ｉ ｅ ｓ ｔ
二醇 ６０ ００沉 淀 有 更 高的 纯 度 ， 一 种 简便 、 效 的病 毒 纯 化 方 法 。 是 有
Ｒ ａ ｄ ｐｕ ｉ ｉ ａ ｉ ｄ ｉ ｅ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ Ｅｅ ｅ ｏ ｉ ｕ ｐｉ ｒ ｆｃ ｔｏｎ ａｎ ｄ ｎｔｆ ｃ ｔｏ ｏ ｎｔ ｒ ｖ ｒ ｓ ７１
ＶＰ ２和 ＶＰ ３相 符 合 。Ｗｅｔｒ ｌｔ 实 为 Ｅ １ 异 性 条 带 。 经 磷 钨 酸 负 染后 电 镜 观 察 ， 看 到 典 型 病 毒 颗 粒 。 采 用终 浓 度 为 ｓｅｎｂｏ 证 Ｖ７ 特 能 １ 的 聚 乙二 醇 ６０ Ｏ ０ ０沉 淀 后 的病 毒 的 感 染性 回 收 率 为 ８ ． ， 经 氯化 铯 垫 层 超 速 离心后 浓 缩 病毒 的 感 染性 田 性 率 为 ２ ． 。 ２０ 再 ９０
Ｇｕ ｎ ｚ ｏ ａ ｇ ｏ ｇ ５ ０ ２ ， ｉ ａ ａ ｇ ｈ ｕ Ｇｕ ｎ ｄ ｎ １ １ ０ Ｃｈ ｎ ）
Ａｂ ｔａ ｔＯｂ ｅｔｖ Ｔｏｅ ｔｂｉｈ ａｓｍｐｅ ａ ｉ ｎ ｆｅｔｖ ｔｏ ｏｐ ｒｆ ｔ ｒｖｒ ｓ７ （ Ｖ７ ）ｆｏ ｃ ｌｃ ｌｕｅ Ｍｅｈ ｓｒ ｃ ： ｊｃｉｅ ｓａ ｌ ｉ ｌ，ｒ ｐｄａ ｄｅｆｃｉｅｍｅｈ ｄｔ ｕ ｉ Ｅｎｅ ｏ ｉｕ Ｅ ｒ ｍ ｅｌ ｕｔ ｒ ． ｔ — ｓ ｙ １ １