一、Vc含量的测定
(一)试剂的准备
(1)20gL-1(2%)草酸溶液:称取草酸(化学纯)20g溶于水中,稀释至1L,贮于避光处。
(2)60 gL-1KI溶液。
(3)10 gL-1淀粉指示剂。
(4)0.1000molL-1(1/6KIO3)标准液:称取在105℃烘过2h的碘酸钾(KIO3,优级纯)1.784g 溶于水,定容至500mL。
此为0.1000molL-1(1/6KIO3)贮备液。
使用时将此贮备液用煮沸并冷却的水稀释100倍,即成0.0010 molL-1(1/6KIO3)标准溶液。
大约每星期应稀释配制1次。
(5)V C标准溶液:称取维生素C(C5H8O5,分析纯)20.0mg溶于20gL-1草酸溶液,并用20gL-1草酸稀释至100mL,此液约含V C0.2mgmL-1,置于冰箱中保存。
临用前当天进行标定。
V C的标定:吸取V C液5.00mL于50mL三角瓶中,加入20 gL-1草酸溶液10mL,60 gL-1KI 溶液0.5mL,10 gL-1淀粉溶液5滴,用0.1000molL-1(1/6KIO3)标准液滴定至溶液突变为浅蓝色为止(约需滴定11mL),计算V C的准确浓度。
(2、3、4都用于此步骤,一般刚买的Vc不用标定,时间久的才标定)
(6)2,6-二氯(酚)靛酚溶液:称取52mg NaHCO3(分析纯),溶于50mL蒸馏水中,煮沸。
再称取2,6-二氯靛酚(分析纯,290.09)50mg加入沸腾的NaHCO3溶液,溶解后冷却,转入250mL容量瓶中,定容。
用折叠滤纸滤于棕色瓶中,保存在冰箱中。
使用前,待溶液恢复至室温后,用V C标准溶液标定其准确浓度。
在冰箱中保存时,每周标定一次。
标定方法:吸取已标定的V C标准溶液5.00mL(含V C约1mg)于50mL三角瓶中,加入20 gL-1草酸溶液10mL,摇匀,用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色,约在15s不褪色为止(应用染料溶液约10mL)。
计算每毫升染料溶液相当于V C的mg数,即滴定度T(应约为0.1mgmL-1V C).
T=c*V1/V2
式中:c=0.2 mgmL-1,V1为Vc标准液体积5mL,V2为2,6-D的滴定体积(2.2mL)计算出T=0.045
(二)、操作步骤
称取水果或蔬菜样品50g置于磨浆机中,加2%的草酸50mL(加入的体积与样品质量相同)磨浆1min,用小烧杯称取20g浆状物全部转移至100mL容量瓶中,用2%的草酸定容,过滤,吸取5mL至50mL三角瓶中,用2,6-D滴定至浅红色(15s内部褪色),记录滴定体积V。
(三)、计算
还原型Vc含量(mgKg-1)=(V-V0)*1000*T/m
V0为顶顶空白液的体积,m为滴定时样品溶液中样品的质量(此处为0.5g)。
二、总酸量(可滴定酸)的测定
(一)试剂的准备
1、0.1molL-1NaOH:2g NaOH溶于500mL蒸馏水。
2、1%酚酞:0.5g酚酞溶于50mL80%的乙醇
50mL(80%的乙醇)*80%=40mL(无水乙醇)100%
3、1%邻苯二甲酸氢钾:称取经100-125℃烘干的邻苯二甲酸氢钾1g左右(精确到0.0001g)加蒸馏水溶解。
定容至100mL,用以标定NaOH。
4、NaOH的标定:准备吸取邻苯二甲酸氢钾10mL至三角瓶中,加酚酞1-2滴,用NaOH 滴至粉色出现。
记录NaOH消耗量(mL),重复三次。
cNaOH=(W/204.2*1000/100*V1)/V2
W为邻苯二甲酸氢钾的质量(g)
V1为用于标定邻苯二甲酸氢钾的体积(10mL)
V2为NaOH的消耗量(5.16、5.08、5.12mL)
204.2为邻苯二甲酸氢钾的当量
此次试验NaOH的浓度是0.0957
(二)操作步骤
取20g黄瓜浆状物,用蒸馏水定容至250mL,取25mL至50mL三角瓶中,加1-2滴酚酞,用标定过的标准NaOH溶液滴定,记录滴定的体积。
(三)计算
酸度(%)=cVK*(250/25)*100/m
其中c为NaOH的标准浓度,V—NaOH的消耗量,K—转换系数
m为样品质量(20g)
三、可溶性蛋白含量的测定(考马斯亮蓝染色法)
(一)试剂的准备
1、考马斯亮蓝溶液:100mg考马斯亮蓝溶于50mL95%的乙醇中,加入100mL85%(W/V)的磷酸,再用蒸馏水定容到1L。
在黑暗中静置2h后过滤储于棕色瓶中,常温黑暗保存一个月。
2、100μg/mL牛血清蛋白(BSA)标准溶液:25mgBSA加水溶解定容至100mL,从中吸取40ml蒸馏水定容至100ml(或10mgBSA定容至100ml即可)。
(二)操作步骤
1、蛋白质标曲的制作
(1)1ml
(三)计算
四、可溶性总糖含量的测定
(一)试剂的准备
1、
(二)操作步骤
(三)计算。