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脲酶试验标准操作规程

脲酶试验标准操作规程
1.目的
规范脲酶试验标准操作规程。

2.原理
某些细菌具有脲酶,能分解尿素生成氨,使培养基变碱,酚红指示剂随之变红色。

3.试剂
3.1 尿素氮培养基成分
蛋白胨 1.0g 氯化钠2.0g
葡萄糖 1.0g 磷酸二氢钾2.0g
0.4%酚红溶液 3.0ml 琼脂18~20g
20%尿素溶液100 ml 蒸馏水1000ml
PH 7.0
3.2 制备将上述成分(除酚红、尿素外)混合于蒸馏水中,加热溶解,校正PH,加入酚红溶液,分装每瓶100ml,置120℃灭菌15分钟备用。

临用时,加热溶解,冷却至55℃左右,加入无菌的尿素溶液10ml,摇匀,无菌分装于灭菌试管,每支2ml,并置成斜面备用。

4.质控
大肠埃希菌ACTT 25922为阴性,奇异变形杆菌ACTT 49005为阳性。

5.操作步骤
将待检菌接种至含尿素培养基中,35℃孵育1~4日。

6.结果判断
红色者为阳性。

7.注意事项
所有尿素培养基均依靠出现碱性来证实,故对脲酶不是特异性的。

某些细菌如铜绿假单胞菌利用培养基的蛋白胨可分解为多量氨基酸,使PH升高呈碱性,造成假阳性。

因此必须用无尿素的相同培养基作为对照。

8.临床意义
主要应用于肠杆菌科中的变形杆菌属细菌的鉴别。

奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。

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