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ELIA优越性
也能标记，使检测的菜单大大丰富，更重要的是为其检测 菜单的开发前景提供了广阔空间。
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电化学发光原理图
T P A +●
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R
u(bp
基态
y
)
2 3
+
激发态
R u ( b p y )3 *
不稳定
光 子 (620nm)
免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
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电化学发光剂
定义：指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。 特点
反应在电极进行 化学发光剂：三联毗啶钌 电子供体为：三丙胺（TPA）
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三联毗啶钌分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N
O
O
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三联吡啶钌 （EC[LR分析u中(b采p用y[R)u3(b]p2y+)3]）2+作特为标点记物，其活化衍生物
化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间 体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激 发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。
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化学发光 反应包括 两个关键 步骤，即 化学激发 和发光。
化学发光反应能级图
化学发光分析
根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发 光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为 化学发光分析。
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方法评价
“链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共价相互作用 的一对化合物，具有牢固而特异的结合，应用此放大系统， 使检测的灵敏度大大提高；
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方法评价
利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结合态和游离态， 方便迅速，实现了精确的全自动化；
标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易 于测定。
电化学发光免疫分析
(Electro-Chemiluminescence Immunoassay, ECLI)
ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨荧 光免疫技术（TRFIA）之后的新一代标记
免疫测定技术； ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物； ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术之一。
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免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
化学发光免疫分析
chemiluminescence immunoassay（ CLIA）
CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一 种新的免疫分析技术。
这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的 高度特异性。
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化学发光分析优点
化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免 了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度，
并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害， 是一种非常优秀的定量分析方法。
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化学发光分析缺点
虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但 化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。
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化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按分离方法不同分
微粒子化学发光免疫测定 磁颗粒化学发光免疫测定
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化学发光免疫分析（ CLIA）分类
按发光剂不同分为
发光酶免疫测定（chemiluminescence enzyme immunoasssay， CLEIA ） 化学发光免疫测定技术 （chemiluminescence immunoassay， CLIA ） 电化学发光免疫测定技术（electro－chemiluminescence immunoassay， ECLI ）
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免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形 的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体 系中共存组分反应产生化学发光的现象。
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电致化学发光（ECL)
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通 过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制， 具有灵活性。
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免疫学检测历史演进
放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于 县级以上医院）；
酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍 使用）；
以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术（20世 纪90年代开始推广使用，产品步入成长期）三个阶段。
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免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
电化学发光免疫分析法
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免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法
免疫分析
基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质
标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强 放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。
发光现象
萤火虫发光
深海鱼发光
发光分类
光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激发态， 当回复至基态时发出较长波长的可见光。
生物发光：反应底物在荧光素酶的 催 化 下 利 用 ATP 产 能 ， 生 成 激 发 态 的氧化荧光素，后者在回复到基态 时多余的能量以光子形式放出。
化学发光
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化学发光 Chemiluminescence (CL)
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ECLI原理
在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化 学 发 光 剂 三 联 吡 啶 钌 [Ru(bpy)3]2+ 标 记 Ab ， 通 过 Ag-Ab 反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光 强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。
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方法评价
采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙 烯微粒。其特点是反应面积比板式扩大20－30倍，吸 附效率高；在液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快；
是[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS） ，该衍生物 具有水溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和 稳定，而且避免了本底噪声的干扰。
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[Ru三 点(bpy联)3]2吡+衍啶生物钌与免（疫球[R蛋白u结(b合p的y分)子3比]2超+过）20仍特 不会影响抗体的可溶性和免疫活性； [Ru(bpy)3]2+分子量小，空间位阻小 ，即便小分子的核酸