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细胞毒理学实验六细胞微核的检测
预冷的玻片
有丝分裂指数(mitoticindex):某一 分裂组织或细胞群中,处于有丝分裂M 期的细胞数占其总细胞数的百分数。
分裂相细胞数 有丝分裂指数 = ————————
细胞总数
有丝分裂指数
实验组(环磷酰胺)
对照组
平均值
取秋水仙素不同剂量组染色体制片,各随机选取3-5个视 野,统计各视野内的有丝分裂指数,并可对结果进行统计 学分析(独立样本T检验),比较两组数据有无显著性差 异。
镜检时,你能在视野中看到几种类型的细胞? 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。
吞噬百分数=
活化的吞噬细胞的数量 100个吞噬细胞
活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量
吞噬指数=
100个活化的吞噬细胞
吞噬百分数
实验组
对照组
吞噬百分数平均 值
吞噬指数
吞噬指数平均值
在实验组和对照组小鼠腹腔液涂片上各随机选取多个视 野,统计各视野内的吞噬百分数和吞噬指数,并对结果 进行统计学分析(独立样本T检验),比较两组数据有无 显著性差异。
纺锤体毒物作用也可以产生微核,主核未能形成而 形成了一组小核。该微核往往比一般典型的微核稍 大。
骨髓中嗜多染红细胞数量充足,微核容易辨认,而 且微核自发率低,是微核试验常用的细胞样本。
1.器材:解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒 温水浴箱、载玻片、酒精灯等.
2.试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy固定液(甲醇: 冰醋酸=3:1;甲醇:冰醋酸=1:1 )、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液、小牛血清等。
小鼠解剖残渣不要放入下水道。
实验结束后,请将实验用小鼠及垃圾放入垃圾袋, 值日生务必带走。
实验中使用的过滤细胞的尼龙滤网请勿丢弃,实验 完毕后放入白瓷盘并用玻璃漏斗或试剂瓶压住。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
将小鼠分成实验组和对照组,实验组小鼠大剂量注射环磷酰胺溶 液一次。实验前三天,每天向小鼠(实验组和对照组)腹腔注射 2%的蛋白胨溶液1ml,实验前30min,向腹腔内注射1%鸡红细胞 1ml。
1. 染色体畸变的类型有哪些? 2. 秋水仙素诱导小鼠产生染色体畸变的主要机制?
3.材料:小鼠(7-12周龄,25-30克,两种性别小鼠 各5只。)
将小鼠随机 分成两组
实验组 对照组
实验前24小时200mg/kg 环磷酰胺
实验前1-2小时 0.5%秋水仙素
0.1ml/只
实验前1-2小时 0.5%秋水仙素
0.1ml/只
实验步骤
❖注射量随动物种类 不同而异。秋水仙 素的主要作用是使 分裂细胞阻断在有 丝分裂中期,增加 中期分裂相的比例。
引颈处死
吸取腹腔液
分别取实验组和对照组小鼠各1只,同时准备好玻片,做 好标记,分别取材,制备腹腔液涂片。
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水,向其中滴加一滴 腹腔液,静置10分钟,使腹水细胞贴壁,弃去生理盐水, 待其稍干后,进行瑞氏染色(浓染1-2min,淡染3-5min)。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
1. 了解微核试验在毒理学评价中的作用。 2. 了解微核试验的染色方法。 3. 基本掌握小鼠骨髓多染性红细胞微核试验的实验
设计、操作步骤及结果评价。
微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的外源 化学物的快速检测方法。
微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律的进入子细 胞形成细胞核时,仍然留在细胞质中的染色单体或者染 色体的无着丝粒断片或环。它在末期以后,单独形成一 个或者几个规则的次核,被包含在子细胞的胞质内而形 成,由于比核小的多而名为微核。微核的出现往往是染 色体断裂剂作用的结果。