设计性实验
探究茶皂素的提取和测定实验
小组成员：袁国明王蓉
一、实验目的
1、掌握水提---醇萃法提取茶皂素的原理、方法和一般步骤。
2、探究不同液料比对水提---醇萃法提取茶皂素的影响。
3、探究提取茶皂素的最佳溶剂热水、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸。
4、掌握用紫外分光光度法测定茶饼中茶皂素的含量。
二、实验原理
茶皂素难溶于冷水、无水甲醇、无水乙醇，不溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚等有机溶剂，稍溶于温水，易溶于热水、含水甲醇、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸，根据以上特性，本次实验来探究提取茶皂素的最佳溶剂。
水提---醇萃法又是在以上基础上，根据茶皂素易溶于热水和95％的乙醇，不溶于冷水性质，用热水浸提茶饼，然后于浸提液中加入絮凝剂 Al 2(SO4 )3，沉降除杂冷却后，再用95％的乙醇转萃提纯一种方法。
茶皂素与香草醛在浓硫酸作用下表现呈色反应，茶皂素的含量和吸光度值成线性关系，本文利用此性质对茶皂素的分析方法进行研究。
三、实验材料
1、实验试剂：95％乙醇；Al 2(SO4 )3；活性炭；NaOH；蒸馏水；香草醛；硫酸；含水乙醇、正丁醇及冰醋酸
2、实验材料：油茶饼粕
3、实验仪器：电子天平、高速万能粉碎机、电热恒温水浴锅、蒸发器、电热恒温鼓风干燥箱、紫外可见分光光度计、三角锥形瓶、纱布、抽滤瓶、滤纸、分液漏斗、烧杯、表面容器、容量瓶、具塞刻度试管
四、实验步骤
1、茶皂素的提取操作
(1) 油茶饼粕的处理
取一定量的油茶饼粕放入高速万能粉碎机中粉碎成油茶饼粕粉末，但不可过细（不利于下一步的过滤），一般粉碎粒度在 l～3 mm为宜。
(2) 探究提取茶皂素的最佳溶剂
称取1g的油茶饼粕粉末4份分别加入到三角锥形瓶中，分别加入热水、含水乙醇、正丁醇及冰醋酸按1:7比例，标记，置入温度为90℃的恒温水浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。
浸取液要趁热用纱布过滤。
(2) 探究一定固液比下恒温热水浴浸提
称取1g的油茶饼粕粉末3份分别加入到三角锥形瓶中，分别加入蒸馏水和固体的比例为1:6、1:7、1:8，置入温度为90℃的恒温水浴锅中处理1.5h，得到茶皂素浸取液。
浸取液要趁热用纱布过滤（茶皂素难溶于冷水，放置冷却后将导致产率下降），将滤渣继续加蒸馏水再次进行恒温水浴浸提，然后趁热用纱布过滤，反复操作三次，将得到的滤液合并。
(3) 加絮凝剂（Al 2(SO4 )3）除杂
絮凝剂可以将浸提液中鞣质、蛋白质、蜡质等不稳定杂质除去，而对于茶皂素的溶解则不会产生影响。
(4) 抽滤（抽滤可以将上述的杂质与茶皂素滤液迅速分离）。
(5) 减压恒温蒸发浓缩
将抽滤除杂后的滤液置于RE 52-99 旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发浓缩至稠状，温度80～90 ℃（减压恒温蒸发,既可以使滤液快速浓缩，又使得茶皂素不会遭到高温破坏）。
(6) 乙醇转萃
将上述稠状液体置于分液漏斗中，加适量的95％乙醇（PH=5）萃取三次，取上层萃取液，合并三次的萃取液。
（茶皂素在95％乙醇中的溶解度很高，而在冷水中的溶解度较低，所以茶皂素转入乙醇中。
而其它杂质在乙醇中溶解度较低，就留在下层液中）。
(7) 脱色
将转萃后的液体置于烧杯中，加入少量活性炭进行脱色处理。
为了增强脱色效果，可将烧杯中液体加热煮沸，并不断搅拌两三分钟，然后用过滤的方法除去活性炭。
(8) 蒸发乙醇
将脱色后的滤液置于RE 52-99 旋转蒸发其中进行减压恒温蒸发乙醇，温度55℃，蒸发至稠状时停止。
(9) 恒温干燥
将上述稠状物置于表面容器中，放入电热恒温鼓风干燥箱进行干燥，温度50～60 ℃。
(10) 称重，得到粗茶皂素
2、茶皂素含量的测定方法
（1）标准溶液的配置
称取0.1 g 茶皂素标准品，用95％乙醇溶解后置入100 mL容量瓶，并用95％乙醇定容。
分别吸取0.9，1.8，2.7，3.6，4.5mL于10 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，则得含茶皂素 0.09、0.18、0.27、0.36、0.45 mg/mL五种不同浓度的标准溶液。
（2）标准曲线的制作
在最大吸收波长545 nm 处测定不同浓度的茶皂素标准液的吸光度，以茶皂素含量为横坐标，吸光度为纵坐标，作标准曲线
3、茶皂素含量的测定
准确称取1g茶皂素粗产品，用95％乙醇完全溶解，定容至100 ml,得1 mg/ml的茶皂素粗产品溶液。
吸取供试液5mL，置50 mL容量瓶中，加香草醛一硫酸显色，充分混匀，用95％乙醇定容，以定容空白液作对比，于545nm处测定吸光度(A)。
根据茶皂素标准工作曲线，计算出茶皂素含量。
五、结果分析和计算
1、粗产品的含量
2、茶皂素含量的百分含量计算
3、提取率的计算
茶皂素的提取率=提取含量/茶皂素的实际含量
4、结果析
用水提—醇萃法提取茶皂素的浸提温度为 90 ℃，浸提时间为1.5 h，液料比为，此时茶皂素的提取率将达到 %。