组织培养育苗
PPT文档演模板
组织培养育苗
1.无菌操作室
- 缓冲室（间）： - 接种室（间）：
PPT文档演模板
8
组织培养育苗
PPT文档演模板
组织培养准备实验室 组织培养育苗
PPT文档演模板
缓冲室
组织培养育苗
PPT文档演模板
培养室
组织培养育苗
PPT文档演模板
无菌室（一）
组织培养育苗
PPT文档演模板
无菌室（二）
①消毒剂种类 ②消毒剂使用浓度 ③消毒处理时间
4.培养过程中污染原因及对策
- 污染的病原类型 - 污染发生原因 - 防污染对策
PPT文档演模板
69
组织培养育苗
三、 外植体的接种
1 定义 2 外植体接种操作前的准备工作
- 接种室的清洁和灭菌 - 超净工作台的清洁和灭菌准备 - 操作人员无菌操作前的准备
② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工 作台上。
PPT文档演模板
66
组织培养育苗
PPT文档演模板
67
组织培养育苗
- 外植体表面灭菌的一般过程
外植体取材
预处理
无菌条件下，70%酒 精表面消毒30S～60S
无菌条件下，消毒剂处理
- 预处理：
无菌水充分漂
洗3～5次
备用
PPT文档演模板
68
组织培养育苗
3.影响外植体消毒效果的因素：
- 培养基灭菌方法
-------湿热灭菌法
培养基湿热灭菌最少时间
液体容积（ml） 121℃所需时间（min）
20---50
15
75
20
250---500
25
1000
30
1500---2000
35---40
PPT文档演模板
60
组织培养育苗
- 培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作 P20
锅内加水 放入消毒桶 装入培养基 盖好锅盖
PPT文档演模板
43
组织培养育苗
硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的 关系
铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体 根的生长
锰参与植物的光合、呼吸代谢 钼参与氮素的代谢 氯是光合作用水光解的活化剂
微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激 活剂参与代谢的调节。
PPT文档演模板
组织培养育苗
缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展， 叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦 ，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。
或
胚状体
完整植物
⊙ 茎尖、茎段、胚及子房等器官做外植体可不经 脱分化直接形成试管苗。
PPT文档演模板
组织培养育苗
⊙植物组织培养原理：一是细胞的全能性； 二是再生作用，与植物体分离的器官具有 恢复完整植株的能力。 ⊙ 组织培养类型：愈伤组织培养、器官培 养、茎尖培养、原生质体培养、悬浮细胞 培养。如花药培养：培养离体花药易获得 单倍体植物。
温室
PPT文档演模板
37
组织培养育苗
培
养
储藏室
准备室
室 灭菌室
缓接 冲种 室室
植物组织培养实验室布局示意图
PPT文档演模板
38
组织培养育苗
⒊药品贮存和配制仪器设备 - 冰箱 - 天平 - 酸度计 ⒋观察分析仪器设备 - 体视显微镜 - 普通光学显微镜 - 倒置显微镜 ⒌其它仪器设备 - 离心机 - 恒温水浴锅
3 外植体接种的具体步骤
切割外植体
培养瓶倾斜靠近 瓶盖外部在火焰上 旋开瓶盖，扣放
酒精灯火焰
旋转灼烧数秒钟
在酒精灯旁边
瓶盖在火焰 上灼烧两圈
用无菌镊子将外植体 均匀放置在培养基上
盖紧瓶盖
PPT文档演模板
0.1～10mg/L
PPT文档演模板
51
组织培养育苗
3、组织培养时，植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下，细胞分裂
素的作用有加强的趋势，但二者在使用 上有一定的顺序关系，处理顺序不同， 培养物的分化状态也不同。规律如下：
⑴ 先用生长素处理，后用细胞分 裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不 容易分化,容易产生多倍体细胞。
PPT文档演模板
40
组织培养育苗
非洲紫罗兰叶片 培养
优化培养基
无蔗糖
1%蔗糖
5%蔗糖
无BAP
PPT文档演模板
BAP 0.1mg/l
BAP 5.0mg/l
组织培养育苗
无NAA
固体培养： 液体培养
PPT文档演模板
组织培养育苗
1、 培养基的构成
水 无机盐类 - 大量元素化合物 - 微量元素化合物
有机营养成分 - 糖类 - 维生素类 - 氨基酸类
PPT文档演模板
52
组织培养育苗
⑵ 先用细胞分裂素处理，后用生长 素处理，细胞分裂也分化。
⑶ 用生长素和细胞分裂素同时处理， 细胞脱分化后分化频率提高。但二者的 使用浓度比值可以决定器官分化方向： 生长素/细胞分裂素比值高时，有利于 根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽 分化，抑制根形成。比值适中时，促进 愈伤组织的形成和生长。
PPT文档演模板
53
组织培养育苗
天然有机添加物质
- 椰汁：CM 100～150ml/L - 酵母提取液：YE 0.01%～0.5% - 番茄汁：5% ～ 10% - 马铃薯汁：100g/L ～ 200g/L - 香蕉泥（汁）：150mg/L ～ 200mg/L
PPT文档演模板
54
组织培养育苗
培养基的配制
PPT文档演模板
22
组织培养育苗
4.仪器设备 无菌操作设备 - 超净工作台
PPT文档演模板
23
组织培养育苗
3、无菌操作设备
PPT文档演模板
超 净 工 作 台
组织培养育苗
无菌接种箱
PPT文档演模板
组织培养育苗
- 电热烘箱 - 接种器具消毒器
PPT文档演模板
26
组织培养育苗
5.培养设备
- 空调 - 加湿器和去湿机 - 定时器 - 培养架 - 摇床或旋转床 - 培养箱
组织培养育苗
培养室
PPT文档演模板
19
组织培养育苗
2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、 过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯 。
PPT文档演模板
组织培养育苗
- 高压蒸汽灭菌器
PPT文档演模板
21
组织培养育苗
3.组培实验室的基本设备 器皿和器械类
⒈玻璃器皿 ⒉器械 - 镊子类 - 解剖刀 - 剪刀 - 接种针 - 细菌过滤器
3.玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿的清洗 用过的培养器皿的清洗 已经污染的玻璃器皿的清洗
PPT文档演模板
58
组织培养育苗
二、灭菌
器具的灭菌方法 - 干热灭菌法 - 高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法） - 火焰灼烧灭菌法 培养基的灭菌方法 - 高温蒸汽灭菌法 - 过滤除菌法
PPT文档演模板
59
组织培养育苗
PPT文档演模板
56
组织培养育苗
培养基的配制
水 准备 母液 混合定容
糖
调pH 加入琼脂 加热溶解
培养器皿 清洗 干燥 分装 封口
高压蒸汽灭菌 冷却 凝固
培养基配制程序
- 培养基具体配制操作过程：P21
PPT文档演模板
接种
57
组织培养育苗
组培实验基本操作技术
器皿和器具的洗涤 P19
1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精 2.常用清洗方法 - 洗涤剂清洗法 - 超声波清洗法
恒
温
光
振
照
荡
培
培
养
养
箱
箱
组织培养育苗
7、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜
倒置显微镜
光 学 显 微 镜
PPT文档演模板
组织培养育苗
三、培养器皿及实验用具
1、玻璃器皿
三角瓶 培养皿 培养瓶
PPT文档演模板
组织培养育苗
2、金属材质用具
接种针 镊子 解剖刀
PPT文档演模板
组织培养育苗
PPT文档演模板
菜豆
组织培养育苗
缺钼典型症状： 叶较小，叶脉间失绿,有坏 死斑点，且叶边缘焦枯， 向内卷曲。 十字花科植物缺钼时叶片 卷曲畸形，老叶变厚且枯 焦。
PPT文档演模板
白菜
组织培养育苗
缺硼典型症状： 受精不良,籽粒减少 ，“
花而不实”， “蕾而不花” ；
根尖、茎尖的生长点停止 生长，而形成簇生状；
桃 树
PPT文档演模板
组织培养育苗
缺铜症状： 新梢顶端叶片的叶尖失绿
变黄，叶片出现褐色斑点至 扩大变成深褐色，引起落叶 。
枝顶端生长不良，其下部 的芽开始生长，形成丛生的 细枝。
PPT文档演模板
菊花
组织培养育苗
缺锰典型症状： 叶脉间失绿褪色，但
叶脉仍保持绿色，脉间 出现坏死斑，缺素症状 由幼叶开始。
常引起各种腐烂病。
PPT文档演模板
马铃薯
组织培养育苗
植物生长调节剂
1、生长素类 - 常用类型：NAA,2,4-D,IBA,IAA - 功能 - 培养基中常用浓度：10-7～10-5mol/L或 0.1～10mg/L
PPT文档演模板
50
组织培养育苗
2、细胞分裂素类 - 常用类型：6-BA,KT.TDZ,2-ip - 功能 - 培养基中常用浓度： 10-7～10-5mol/L或
1、基本培养基母液的配制 ⑴ 单配法 ⑵ 混配法 ① 按照避免难溶性沉淀形成的原
则和物质种类的不同，将基本培养基 配方所包括的物质进行分组；
