?优点：直观、快速 ?缺点：误差较大，不适合细菌计数（太小）
其原理与计数板的构造有关
?每块计数板上有两个计数室 （正方形），盖上 盖玻片后容积是一定的（0.1mm 3），深为 0.1mm ，边长为1mm ，其上面有精确的刻度。
计数室
其刻度一般有两种规格
16个中方格，每个中方格分 25个小格 16 ×25 25个中方格，每个中方格分 16个小格 25 ×16
注：该法适合菌浓度较高ຫໍສະໝຸດ 样品。比浊法在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度 成正比，即与吸光值成正比， 菌数越多，吸光值 越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下 测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 该法适合测定大量的细胞。
显微镜直接计数法
利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一 种微生物计数法
1ml
1ml
×2 ×2
1ml
×2
最常用的活菌计数法。
将适当稀释的菌液倾注平板或涂布在平板表面，经保 温培养后，每个细胞形成一个菌落，即菌落形成单 位。以平板上出现的菌落数乘以稀释度就可以计算 出原菌液的含菌量。
干重法
? 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出 来，然后烘干至恒重 (干燥温度可采用105℃、 100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的 10% —20% 。
稀释100 倍)
2.器具
显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片 。
四 实验方法
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细 口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点 一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗 透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满 菌液。注意不可有气泡产生。
3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 作为两个菌体计算；
5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头 上用水柱清洗，直到洗净为止。
6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计 算。
特别注意
血球计数板均有编号，一人一 个，务必小心使用，若损坏，需原 价赔偿或赔偿原物！
五、作业
显微直接计数结果
?÷?D · ? ? ?D ?ú êy
12345 A
μ ú ò? êò μ ú ?t êò
?t êò
B ?ú êy /ml ? ?ù ?μ
1100 1
100
4. 显微镜计数
静置几分钟，将计数板放在显微镜下， 先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进 行计数
5. 清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留 物为止。
注意事项
1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
2、菌液浓度以每小格有 5-10 个菌体为宜。
? 我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总菌数 。如图：
5个方格的总菌数
? 计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
? 1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三 实验器材
1.菌种
酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液(已
实验三、微生物数量的测定
一、实验目的：
?掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计 数的方法
?了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应 用
二、实验原理
?常用的微生物细胞数目的检测法 血球计数板法 平板菌落计数法 干重法 比浊法等
平板菌落计数法
1ml 1ml 1ml
1ml
9ml 9ml 9ml
9ml