公共卫生苯扎溴铵消毒湿巾杀菌效果与毒性实验研究翟文慧,王万海,张聪恪,刘吉起河南省疾病预防控制中心 郑州市 450016摘要 目的 了解苯扎溴铵消毒湿巾的杀菌效果和毒性。
方法 按卫生部 消毒技术规范 (2002年版)有关要求,对苯扎溴铵消毒湿巾有效成分含量、杀菌效果及毒性进行检测评价。
结果 经检测,该消毒湿巾苯扎溴铵含量为3 60g/L,经37 90d存放后,苯扎溴铵含量为3 49g/L,下降率为3 05%,有效期可定为两年;该样品p H值为5 90;微生物污染检验均符合要求;消毒湿巾样片对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌作用2m in,平均杀灭率为别为99 12%、99 32%、98 53%,作用5m i n、10m i n、20m i n,平均杀灭率均为100%;消毒湿巾样片对实验动物一次完整皮肤刺激试验属无刺激性;消毒湿巾样片对实验动物未见皮肤变态反应。
结论 该苯扎溴铵消毒湿巾杀灭微生物效果良好,各项毒性试验都符合要求,安全无毒。
关键词 苯扎溴铵;湿巾;杀菌效果;毒性中图分类号:R187 文献标识码:B 文章编号:1672 3422(2008)23 0042 03Experim ent al St udy on Germ ici dal Efficacy and Toxicity of Benzalkoniu m Bro m id D isinfectionW et TissueZ HAI W enhui,WANG W anhai,Z HANG Congke,et alH enan P rovincial Center for D isease Control and P revention,Zhengzhou450016,ChinaABSTRACT Objective To explore the ger m ic i d al e fficacy and tox icity of benza l k onium br o m i d d isi n fection w et tissue.M et hods Exa m i n ation and eva l u ation w ere conducted on the content of ef fective co m ponen,t ger m ic i d a l e fficacy,and tox icity acco r d i n g to Technical Standard For D isi n fection (2002) .Results The benza l k oniu m bro m i d conten t in disi n fection w et tissue w as3.60g/L,after stored at37 f o r90days,the content o f the benza l k onium bro m i d w as3.49g/L and decreased by3.05%,its expiration da te is2years,p H is5.90.The m icrob i o log ical conta m ination tests are in line w ith require m ents.The results sho w ed t h at the d isi n fection w et tissue sa m p le w ith a2m i n contact ti m e k illed99.12%of Staphy lococcus aureus,99.32%o fE sc herich i a coli and98.53%o fC and i d a a l b icans respectively.w it h a5m i n,10m i n and20m i n contact ti m e,the average k illing rate w as100%.In ani m a l tests,the der m a l irritation test w ith the d isinfection w et tissue sa m ple w as no t irr itati o n,and theskin sensitisation test w ith the d isinfection w et tissue sa mp le had not sensiti n g effec.t Conc l u sionB enza l k onium bro m id d isi n fection w et tissue has good ger m ic i d al efficacy and safety,The tox icity testsm eet the requ ire m ents.KEY WORDS Benzal k on i u m bro m id;W et tissue;Ger m ic i d al efficacy;Tox ic ity苯扎溴铵为阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂[1],能改变细胞浆膜通透性,使菌体胞浆物质外渗,阻碍其代谢而起杀灭作用。
广泛应用于皮肤、黏膜的消毒[2]。
本试验以其为主要成分制成消毒液,以3.5g/L左右的浓度浸湿灭菌无纺布,制成3.0c m 3.0c m的试验用消毒湿巾,用塑膜密封包装。
为了解该产品的有关性能,了解此类产品反复使用的安全性,我们对苯扎溴铵消毒湿巾的稳定性、杀菌效果、毒性等指标作了试验观察及研究。
1 材料与方法1 1 材料 苯扎溴铵消毒液(3.5g/L左右);苯扎溴铵消毒湿巾:用苯扎溴铵消毒液浸湿灭菌无纺布制成,主要成分为苯扎溴铵。
42医药论坛杂志 2008年12月 第29卷 第23期1.1.2 试验用菌种 大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)由军事医学科学院提供。
1.1.3 试验动物 日本大耳白兔,由中牧股份郑州生物药厂实验动物中心提供;白色豚鼠,由华中科技大学同济医学院实验动物部提供。
1.1.4 试剂 邻苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液;混合磷酸盐缓冲溶液;0.02004m ol/L的四苯硼钠标准溶液;中和剂:10g/L甘氨酸+5g/L硫代硫酸钠+5g/L卵磷脂+20m l/L吐温80。
1 2 方法1 2 1 pH值测定 直接取苯扎溴铵消毒液,用p H S-3C型精密pH计测定样品p H值。
1 2 2 含量的测定 取苯扎溴铵消毒液25.0m,l 加蒸馏水50m l与氢氧化钠1m,l再加溴酚蓝指示液0.4m l与氯仿10m l。
用四苯硼钠标准滴定液滴定。
计算含量。
1 2 3 稳定性的测定 苯扎溴铵消毒湿巾经37 存放90d后,用1.2.2的方法测定含量,计算下降率。
1 2 4 微生物污染检验 取苯扎溴铵消毒湿巾0.5g加人4.5m l中和剂,按 消毒技术规范 (2002年版)测定细菌菌落总数、大肠菌群、真菌菌落总数、致病菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌)。
1 2 5 菌液制备 取大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)等菌株的第5-6代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18h~24h),用5m l0.03m o l/L磷酸盐缓冲液(PBS)洗下菌苔,使菌悬液均匀后用上述PBS稀释至所需浓度。
1 2 6 中和剂选择试验[3] 试验用苯扎溴铵消毒湿巾样片(2.0c m 3.0c m),用金黄色葡萄球菌和白色念珠菌菌悬液进行试验。
试验分为6组:1消毒剂+菌悬液;2(消毒剂+菌悬液)+中和剂;3菌悬液+中和剂;4(消毒剂+中和剂)+菌悬液;5稀释液+菌悬液;6稀释液+中和剂+培养基作为阴性对照。
结果判定,当第1组无菌生长或有少数菌生长,第2组菌数较第1组为多,但较第3、4、5组为少,第3、4、5组间菌数误差率 15%,第6组无菌生长,表明所选中和剂及其浓度适宜。
1.2.7 载体浸泡定量杀菌试验[3] 在试验温度20 1 条件下,取苯扎溴铵消毒湿巾样片和对照样片(不含抗菌成分,其他同试验样片,且经灭菌处理)各4片,分成4组置于4个无菌平皿内,取菌液分别在每个被试样片和对照样片上滴染100 ,l计时2、5、10、20m i n,用无菌镊将样片投入含5.0m l中和剂的试管中,充分混匀,分别吸取0 5m l置于两个平皿,用40 ~45 的营养琼脂倾注,37 1 培养48h作活菌菌落计数。
试验重复3次,计算杀菌率。
评价标准:杀菌率 90%,产品具有杀菌作用。
1.2.8 一次完整皮肤刺激试验 取体重2~3kg 的雄性日本大耳白兔3只,试验前将动物背部脊柱两侧左、右各约3c m 3c m的毛去掉,采用自身对照法,将苯扎溴铵消毒湿巾样片覆于一侧所暴露的皮肤上,另一侧作对照,4h后用温蒸馏水去除残留受试物。
分别于去除受试物后的1h、24h、48h观察皮肤刺激反应。
1.2.9 皮肤变态反应试验 取200~300g的白色豚鼠32只,雌雄各半,试验前将豚鼠背部左右两侧3c m 3c m范围内去毛,将苯扎溴铵消毒湿巾样片贴在左侧去毛区,持续6h。
第7d和第14d以同样方法重复一次。
末次诱导后14d,将苯扎溴铵消毒湿巾样片贴在右侧去毛区,持续6h后洗去受试物。
24h和48h后观察皮肤反应。
2 结果2 1 p H值测定 苯扎溴铵消毒湿巾p H值为5 90。
2 2 含量及稳定性的测定 苯扎溴铵消毒湿巾中苯扎溴铵含量为3.60g/L。
经37 存放90d后含量为3.49g/L。
下降率为3.05%,贮存有效期可定为二年。
2 3 微生物污染试验 苯扎溴铵消毒湿巾的细菌菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、溶血性链球菌、真菌菌落总数均符合 消毒技术规范 (2002年版)的规定。
2 4 中和剂试验 可用10g/L甘氨酸+5g/L硫代硫酸钠+5g/L卵磷脂+20m l/L吐温80的磷酸盐缓冲溶液中和该苯扎溴铵消毒湿巾中的苯扎溴铵,且中和剂及中和产物对金黄色葡萄球菌及白色念珠菌及培养基无影响。
见表1。
表1 中和剂选择试验结果组别3次试验平均回收菌量(cf u/m l)金黄色葡萄球菌白色念珠菌1消毒剂+菌悬液002(消毒剂+菌悬液)+中和剂1573273菌悬液+中和剂2.30 1042.40 1044(消毒剂+中和剂)+菌悬液2.19 1042.24 1045稀释剂+菌悬液2.40 1042.46 1046稀释液+中和剂+培养基00注:金黄色葡萄球菌中和剂选择试验第3、4、5组误差率为3 19%;白色念珠菌中和剂选择试验第3、4、5组误差率为5 66。