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2008─2009学年 第 2学期
《基因工程原理》课程考试试卷(A 卷)参考答案
专业: 生物技术
年级:2006 考试方式:闭卷 学分:4 考试时间:120分钟
一、名词解释(每小题2.5分，共15分)
1、 基因工程：是指在分子水平上进行的遗传操作，指将一种或多种生物提（供体）的基因
或基因组提取出来，或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组，转移到另一种生物体（受体）的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。

2、 星活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH 值等，会使一些核酸内切酶
的识别和切割序列发生低特异性，即Star activity 现象。

3、 插入型载体：只具有一个可供外源DNA 插入的克隆位点。

4、 反转录PCR ：在逆转录酶的作用下、以mRNA 为模板合成互补的cDNA ，再以cDNA 为
模板进行PCR 反应。

5、 感受态：受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂法）的处理后，细
胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA 的载体分子通过的感受态细胞。

6、 考斯质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNA cos 序列和质粒复制子的特殊类型的载
体 二、填空题(每小题1分，共10分)
1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以 防止气泡 ；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 抑制了DNase 。

2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为 严谨型质粒 。

和 松弛型质粒 。

3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入 Lytic growth 也可以进入 Lysogenic state 。

如果其基因组 DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入 融源状态。

；它也可以选择进入 融菌状态 ，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。

4、ddNTP 与普通的 dNTP 的不同之处在于 ddNTP 2’和3’双脱氧 ，它们可以在 DNA 聚合酶的作用下，通过其 5’ 掺入到正在增长的 DNA 链中，导致链延伸反应终止。

5、Klenow DNA 聚合酶是 DNA 聚合酶Ⅰ 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 5’—3’外切酶 活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。

三、选择题(每小题1.5分，共15分)
1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（ C ）。

A 、特定的三联密码；
B 、双链 DNA 的特定碱基对；
C 、双链 DNA 的特定碱基序列；
D 、单链 DNA 的特定碱基序列。

2、在切口平移方法标记 DNA 探针时只能使用（ B ）。

A 、Klenow 酶；
B 、DNA 聚合酶 Ⅰ；
C 、DNA 聚合酶 Ⅱ；
D 、DNA 聚合酶 Ⅲ。

3、在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（ C ）。

A 、反应体积；
B 、酶反应温度；
C 、反应时间；
D 、酶量。

4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（ B ）。

A 、退火温度过低；
B 、退火温度过高；
C 、dNTP 浓度过高；
D 、循环次数过多。

5、以下不属于 PCR 的应用的为（ D ）。

A 、随机扩增多态性 DNA （RAPD ）；
B 、扩增片段长度多态性（AFLP ）；
C 、RACE ；
D 、S1 酶作图。

6、pUC18 与 pUC19 的区别在于（ B ）。

A 、二者的选择标记不同；
B 、二者的多克隆位点方向相反；
C 、pUC18 无 lacZ 基因；
D 、pUC19 无 lacZ 基因。

7、有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（ D ）。

A 、用荧光代替了同位素标记；
B 、激光扫描分析代替人工读序 基；
C 、本原理与手工测序相同；
D 、不再需要引物。

8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征( D )。

A、可以独立复制；
B、有选择标记；
C、有多克隆位点；
D、含lacZ。

9、在分离DNA 过程造成DNA 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（C ）。

A、核酸酶的降解；
B、化学降解；
C、保存液中未加一滴氯仿；
D、物理剪切。

10、氨苄青霉素的工作原理为（A ）。

A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；
B、可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；
C、可以抑制核糖体的转位；
D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。

四、简答题(每小题5分，共25分)
标记的原理及基本步骤。

答：RAPD应用了PCR反应的原理，以不同的基因组DNA为模板，以单一的随机寡聚核苷酸（长度多为10个核苷酸）为引物而获得的一定扩增产物。

由于不同基因组DNA序列存在着差异，其不同区段上可与引物同源互补的位点不同，扩增产物的数量、大小也不同，因而表现出多态性。

1)基本步骤：
2)DNA的提取
3)模板DNA浓度和质量的检测
4)PCR扩增
5)电泳检测：PCR结束后每个样品加4ul凝胶上样缓冲液，每个泳道点样20ul。

6)将凝胶浸于1ug/ml的EB中30min~60min，用水清洗约10min，观察、拍照。

7)统计分析：记录条带清晰的RAPD条带，计算带纹相似率；计算带频率、群内遗传纯度；
计算DNA片段大小。

2、一个理想的载体应具备那些特点？
答：
a)较小的分子和较高的拷贝数；
b)多个单一的限制性内切酶位点；
c)两种以上的选择标记；
d)易导入宿主细胞并复制和表达。

3、试回答影响限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素？
答：
1)DNA样品的纯度；
2)DNA甲基化程度；
3)反应条件；
4)酶的纯度；
5)酶切反应的温度和时间。

4、经典RACE 克隆的原理是什么？
答：
反向PCR；
瞄定PCR；
末端转移酶法。

5、
6、采用同聚物加尾的方法进行dscDNA 克隆，一般采用dC/dG 而不采用dA/dT ，简述其
原因？
答：
（1）
（2）dA/dT退火温度低；
（3）反转录用的dT引物。

五、问答题(每小题10分，共20分)
1、一个携带有氨苄青霉素和卡那霉素抗性基因的质粒仅在卡那霉素基因中有EcoRⅠ识别位点。

消化后与目的DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的E. coli菌株，试问：
（1）利用什么方法筛选接受了质粒的宿主细胞和没有接受质粒的宿主细胞？
（2）如何区分接受了含有目的DNA的重组质粒和空质粒的克隆？
答：
（1）：用氨苄青霉素筛选，抗氨苄青霉素的为带有质粒的宿主细胞。

（2）：用卡那霉素筛选，不抗卡那霉素但抗苄青霉素的为含有目的DNA的重组质粒的宿主细胞。

2、已知拟南芥、水稻ADH、甘蓝型油菜、矮牵牛等物种的ADH基因序列，如何得到棉花的ADH基因（利用高保真酶），请谈谈它的基本步骤？
答
1)从Genbangk下载拟南芥、水稻ADH、甘蓝型油菜、矮牵牛等物种的ADH基因序列；
2)将各序列多重比对，设计保守区引物；
3)提取棉花RNA；
4)将RNA逆转录为cDNA；
5)PCR扩增；
6)胶回收、连接、转化、检测；
7)测序，得到保守区序列；
8)根据保守区序列设计RACE引物；9)RACE扩增，并测序；
10)得到全长基因序列。

六、综合题(15分)
当前，甲型H1N1流感疫情迅速从墨西哥和美国蔓延至包括中国在内的几十个国家，全球已报道病例达到44287人。

快速有效的诊断是有效的防治该疾病的重要措施之一，请根据基因工程的相关知识，设计一种高效、快速的检测H1N1的方法？
答：
1)从病人体内分离H1N1病毒；
2)测序；
3)设计特异引物；
4)在群体中鉴定引物特异型；
5)取疑似样本；
6)PCR扩增。

7)电泳。