cDNA反转录试剂盒
1
将试剂盒组分在冰上解冻
2
下列表格，计算各组分的的体积来准备反应体的数量。
注意：准备RT混合液必须在冰上
成分
试剂盒反应体积（每微升）
含有RNase抑制剂
不含RNase抑制剂
10X RT Buffer
2.0
2.0
25X dNTP Mix(mM)
0.8
0.8
10X RT Random Primers
2.0
2.0
MultiScribeTMReverse Transcriptase(反转录酶)
1.0
1.0
RNase inhibitor(RNA酶抑制剂)
1.0
--
Nuclease-free H2O
3.2
4.2
总量
10.0
10.0
3
将2X RT混合液放在冰上，并轻轻混匀
1、2X RT混合液的准备（每20微升反应）
注意：这些程序对于使用高容量cDNA反转录试剂盒已经优化
Step1
Step2
Step3
ep4
温度
25℃
37℃
85℃
4℃
时间
10min
120min
5min
∞
2、cDNA反转录反应
1、吸取10微升的2X RT混合液到96孔板的每个孔，或者单个的一个试管
2、吸取10微升的RNA样液加到每个孔中，用吸管上下吸两次混匀。
3、密封平板或试管
4、短暂离心平板或试管，沉淀物质，消除气泡
5、将平板或试管放于冰上，直到你准备好负载人循环仪
3、设计热循环仪程序
1、
热循环仪的的使用程序如下