监测抽样作业指导书一、目的对监测抽样进行有效的质量控制，以确保监测结果的客观性、准确性、有效性。

二、适用范围本程序适用于各种动物的血清学监测抽样和病原学监测抽样。

三、职责1.样品抽样人员应按照本程序进行抽样、封样、编号，同时作好抽样登记，对样品作适当处理以符合血清学和病原学监测样品的要求。

2.业务接待室负责发放、收回抽样登记表，接收保存样品，并如实作好接收登记。

3.抽样人员：抽样人员由XX区动物疫病预防控制中心指派，或由XX区动物疫病预防控制中心派人监督抽样。

抽样人员不得少于两水，对大规模养禽场应适当增加抽样人员。

4.家禽抽样比例：种禽场按存栏的1 %抽样，规模化养禽场按存栏的0.5- l %抽样，每个场抽样应不少于50份，散养禽以自然村为单位。

5.家畜抽样比例：种畜场采样比例不应低于10%规模场不应低于5%散养家畜按自然村为单位。

6.抽样设备：2-5ml注射器或采血针头、无菌棉签、小青瓶、1.5ml离心管。

7.抽样单：抽样单格式详见《动物疫病监测抽样登记表》。

抽样时应作好记录，同时填写一式三份《抽样登记表》，分别由被检单位、抽样单位及本中心各保留一份。

8.抽样方式：采用随机数字选样法进行抽样。

使用《随机数字表》，从中随机选定一个数字作为起点，在该点以后的随机数字中选取有意义的样品编号的数字作为抽样编号，按此编号抽样。

9.抽样工作流程：9 .1抽样人员凭抽样任务单到业务接待室领取动物疫病监测登记表，到指定地点采样。

9 .2采样后，抽样人员及时对样品进行封样，同时做好抽样登记。

抽样登记表一式二份，被检单位存留一份，另一份随样品送中心业务接待室。

贮存和运送：10.1为确保分析样品的稳定性和样品的完整性，抽取的样品由专人妥善保存，在规定的时间送达业务接待室。

10.2样品在冷藏条件下贮存运送。

血清未析出时，应静止避免晃动。

已污染或溶血的样品不能采用一、目的为确保本中心所适应原始记录规范、详实、溯源性等特点，特制定本作业指导书。

二、适用范围本中心所有的原始记录记载。

二、原则1原始记录是实验室管理体系文件的组成部分，是检测活动的见证性文件，是对已完成的检测工作各环节的真实记载，是出具检测报告的唯一依据。

实验室要真实、完整、准确地记录各项检测活动，渝须编制好一套简洁明了、方便实用且符合实际检测工作要求的原始记录。

2、原始记录主要由现场采样/检测记录、委托检验单、样品接收单、检测任务单、实验室检测一记录、检验报告底稿等组成。

3、原始记录的版面格式包括记录的名称、用途、受控标识、样品编号、检测、复核、审核的时间和人员、相关信息等内容。

粕关信息是检测原始记录的主体部分，不同类别的检测原始记录其内容也有较大的差别。

一般包括样品的基本信息、检测环境和仪器设备情况、检测相关情况和数据三大部分。

3.1样品的基本信息包含受检单位名称、样品名称、数量、性状、采样地点、保存的条件、送检及采样的时间、检测项目等内容。

3.2检测环境和仪器设备情况包括检测时的温度、湿度；使用的主要仪器设备的名称、型号、编号、检测前后的状态；试剂名称、批号或内部编号等。

3.3检测相关情况和数据包括检测的时间、方法及依据，样品处理等，检测过程中观察到的现象和异常情况的处理，从设备上直接读得的数值或打印记录等。

4、检测原始记录应尽可能地方便检测人员填写。

实验室检测记录时，除经常一起检测的项目可编制多项目的检测记录外，对不经常一起检测的项目应尽量编制单项目的检测记录。

一、目的为确保本中心购进的诊断试剂的质量，应及时进行验收和质量验证，特制定本作业指导书。

二、适用范围：本中心计划购进的所有诊断试剂。

三、职责1.仪器设备室人员负责诊断试剂的验收、记录。

2.检测室人员负责对诊断试剂的质量验证。

3.资料档案管理人员负责相关记录的存档，建立年度对供应商的评价表和合格服务方名录。

四、工作程序1.诊断试剂的验收：诊断试剂送至中心后，由诊断试剂管理人员进行验收。

诊断试剂管理人员对试剂盒的包装、数量、有效期等内容进行逐一核对，并填写“供应品验收记录”。

诊断试剂应保持包装完好、无破损、试剂在有效期内、数量符合订货数量。

验收合格的诊断试剂按说明书要求进行入库保存。

如发现有破损、超过有效期、数量与订货数量不符等情况，一律按不合格诊断试剂处置（见3不合格诊断试剂的处置）。

2.诊断试剂的质量验证：诊断试剂入库后，诊断试剂管理人员及时通知相关检测人员进行诊断试剂的质量验证。

对于采购数量大、价格相对便宜的诊断试剂，如间接血凝试剂、血凝和血凝抑制试剂等，每到一批试剂后，同一批次随机抽取一盒（套）进行验证试验。

对于采购数量少、价格昂贵的诊断试剂, 如PCR ELISA试剂盒等，不单独做质量验证，将第一次检测样品的试验结果作为质量验证的依据。

验证试验严格遵照相关程序，由两名检测人员进行，试验设立阴性、阳性对照，并做好原始记录。

如试验对照成立，判为试剂质量合格；试验对照不成立，判为试剂质量不合格。

试验结果及时反馈至诊断试剂管理人员，验证记录交资料档案室存档。

3.不合格诊断试剂的处置：在诊断试剂的验收和（或）验证过程中发现不合格诊断试剂时，应及时报中心技术负责人，由技术负责人安排人员与供货商联系，协调处理，同时填写“不合格供应品处置记录”。

4.记录：应做好诊断试剂的验收、验证等各项工作记录，交资料档案管理人员存档，资料档案管理人员根据记录建立“供应商评价表”和“合格供应商名录”。

五、记录表格“供应品验收记录”“不合格供应品处置记录”“供应商评价表”“合格供应商名录”移液器自校检查作业指导书一、目的利用空气吸力移取均值、中质密度和中等粘度的液体。

二、适用范围不可用于操作与聚丙烯反应或有较高的蒸汽压的液体。

三、环境条件温度：20C 士5C,湿度：50% 士10%所需仪器和试剂天平，蒸馏水四、操作步骤1、松紧度检验：吸取液体后竖直移液器，停留10秒钟。

如有漏气则会形成液珠滴下。

2、移液：在吸取液体时，将枪头插入液体两至三毫升下，移液器用在第一档，缓慢吸取液体后停留1秒左右时间，以免空气吸入，注意不要将液体吸入移液器中。

在排除液体时，先将移液键作用在第一档，延容器壁缓慢排除液体，然后将移液键作用于第二档，将残留体积完全排除。

然后顶部的枪头弹出，排掉枪头。

3、称量及计算：调整可调加样器，在加样器最大、最小和中间吸取量上分别连续吸取五次水，分别称量。

通过五次称量计算出平均体积。

4、判定标准：计算出的平均体积同加样器读数比较，误差在3灿内为合格。

如果超出这一范围，应清洗，维修并重新校正。

重新校正仍不合格的，退回厂家修理或作废弃处理。

5、有效期：有效期为一年。

如出现故障，需排除故障后再次校订，校订合格方可使用一、口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验1.适用范围用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。

检测猪血清应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。

2.检测试剂口蹄疫病毒VP1抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液（I.OMHZSQ）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。

3.检测步骤3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30C 以上的环境中）3.2取出试剂盒中的样品稀释液）A1、B1两孔作为阴性对照，Cl、D1两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品）3.3在稀释板的各孔中加200样品稀释液。

在相应各孔中分别加入10此对照血清或被检血清样品。

用加样器重复吹吸数次。

稀释每个样品时必须使用不同的吸头）3.4取出抗原包被板）3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37 士2C下孵育60 士5分钟。

3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作25 倍稀释。

3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔300吨，洗涤6次，拍干。

3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100倍稀释，现配现用。

3.9每孔加入100此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37±2C 下孵育30±2分钟。

3.10 重复3.7。

3.1仃MB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量混合，现配现用。

3.12每孔加入100此底物工作液，加盖或封膜后，置37±2C 下孵育15±1分钟。

3.13每孔加入100此终止液，并轻轻振荡混匀。

3.14在15分钟内，用酶联读数仪测定在450nln波长下的OD值。

结果判定4.1猪口蹄疫病毒vPI结构蛋白抗体检测结果判定：4.1.1阴性对照孔平均0D值应续0.15，每个阳性对照孔0D值应妻0.5 , 且簇2.0。

否则，试验无效。

临界值=0.23x阳性对照孔平均OD值。

4.1.2被检样品孔OD值＜临界值时、判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阴性。

4.1.3被检样品孔OD值〉临界值，判为阳性。

4.1.4对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。

重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阴性。

4.1.5当猪口蹄疫病毒vPI结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终判定｝4.2牛、羊口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体检测结果判定：4.2.1阴性对照孔平均0D直应W 0.2，每个阳性对照孔0D直应》0.5，且 < 2.0。

否则，试验无效。

临界值=0.23x阳性对照孔平均0D直。

4.2.2被检样品孔0D直V临界值时，判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VP1 结构蛋白抗体阴性。

4.2.3被检样品孔0D直》临界值，判为阳性。

4.2.4对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。

重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴性。

4.2.5当牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终判定。

一、高致病性禽流感血凝抑制（HI）试验1.适用范围该试验是目前WH进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。

可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。