第4卷第5期北华大学学报(自然科学版)Vol.4No.5 2003年10月JOU RN AL O F BEIHU A U N IV ERSIT Y(N atural Science)Oct.2003
文章编号:1009-4822(2003)05-0433-02
虫草菌感染代寄主昆虫黄粉虫的研究
潘丽梅1,贾春生1,王敏2,王广发3,刘春富4
(1.北华大学林学院,吉林吉林132013;2.江苏省扬州市邗江区林蚕指导站,江苏扬州225000;
3.吉林省白石山林业局营林处,吉林吉林132503;
4.敦化市林业局江东苗圃,吉林敦化133700)
摘要:对冬虫夏草菌进行培养、纯化、液体培养,使其繁殖扩大,并制成孢子悬浮液;对寄主昆虫)黄粉虫进行人工饲养、接种感染等试验研究.通过试验发现,代寄主昆虫被感染率达到30%,感染是多种因素综合作用的结果.
关键词:冬虫夏草;感染;黄粉虫
中图分类号:S567.35文献标识码:A
冬虫夏草[Cordy cep s sinensis(Berkeley)Sacc.],别名虫草、冬虫草、夏草冬虫.属于真菌门(Eumycota)、子囊菌亚门(Ascomycotinta)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordycep s).冬虫夏草为名贵中药材,以全草入药.
冬虫夏草的人工培育是最近几年人们研究的热门课题之一.至今为止在完全人工控制的条件下,将冬虫夏草菌感染寄主幼虫,使之产生与天然冬虫夏草相同的子实体的研究工作尚未取得突破性进展.本文是在前人实践的基础上,通过试验,阐述了黄粉虫感染虫草菌的过程.
1材料与方法
1.1菌种
本试验菌种来自华中农业大学菌种保藏中心,经斜面培养、纯化和三角瓶液体扩大培养.
液体培养:为了获取在接种时所需的孢子悬浮液,首先将分离出的菌丝体进行液体培养,在液体培养过程中不断分生出孢子,孢子悬浮于液体培养基表面.这样的孢子悬浮液喷洒在寄主昆虫的身体上和食物中,才能逐步将昆虫感染.采取振荡培养方法,将静止一段时间的装有虫草菌的三角瓶置入振荡培养箱中,调节温度至25e,转速为120r/m in进行振荡培养,在振荡培养期间,定期进行观察,3d后,在培养液中有菌丝球出现,10d后菌丝球长满液体表面,液体培养完成.将培养出的虫草菌放入冰箱中备用.
1.2寄主昆虫)))黄粉虫
黄粉虫[Tem mibr io molitor Linne.]属昆虫纲,鞘翅目,拟步甲科,粉虫属.大多生活在各种农林产品库房中,种源常见,容易饲养.黄粉虫的生长过程分成虫、卵、幼虫、蛹4个虫态期.幼虫一般体长29~35 mm,体壁较硬无大毛、有光泽,虫体为黄褐色,节间和腹面为黄白色,头壳较硬,为深褐色.各足转节腹面,近端有2根粗刺.在自然界中,黄粉虫1a发生1代,越冬幼虫3月中旬至4月化蛹,5月中旬羽化并产卵.在实验室中饲养,一般1a可发生2~4代,黄粉虫的幼虫的生长期为85~130d,经过10~15个龄期.
1.3菌龄与接种浓度
将混有菌丝段的孢子悬浮液稀释到30%.冬虫夏草一般在寄主蝙蝠蛾二龄幼虫期易被虫草菌感染,因此,接种时间应在幼虫阶段进行.接种方法:先用冬虫夏草的子囊孢子制成较浓的孢子悬浮液,用喷雾器将其均匀地喷到10龄黄粉虫幼虫体上,每d喷2~3次,共喷3d.喷洒时应在阴天或傍晚太阳落山时进行,也可选择在晚上8时左右进行喷洒,因为这时幼虫活动较盛.为了获得较大的感染机会还应在幼虫的收稿日期:2002-07-22
基金项目:吉林省科委资助项目(20020624)
作者简介:潘丽梅(1963-),女,副教授,硕士,主要从事病原真菌、细菌鉴定,食、药用菌开发利用研究.
434北华大学学报(自然科学版)第4卷食物中混入冬虫夏草的菌丝体或子囊孢子.
1.4感染的过程
虫草菌体成熟后散发出的子囊孢子一般经蝙蝠蛾的幼虫体壁、气孔、口腔或直接通过躯体的其WB 孔道进入体内,菌丝体逐渐浸入虫体内的血腔和肠道分解虫体内的组织和各种器官,继续萌发和不断生长,很快可以布满昆虫整个身体内部.
2结果与讨论
被感染的昆虫初期行动迟缓,后期表现烦躁,数d后外壳出现明显褪色,由深褐黄转变为淡黄色,以后全身披上灰白色菌丝.昆虫体内被彻底分解后,虫草菌丝发育进入1个新阶段,菌丝体从营养生长转化为生殖生长.
在虫草菌感染代寄主的过程中,能否形成菌核,应根据虫草菌同步生长的吻合程度.本试验采用的虫草头孢霉的菌龄为10~15d.接种10~15龄幼虫,保持温度15~18e与蝙蝠蛾幼虫在不同虫草产地,被感染的机理和生成的菌核形态有相同之处.代寄主虫受虫草菌感染是多种因素综合作用的结果,除了生态上的相互适应之外,还涉及幼虫的外表皮结构、是否处于蜕皮期以及生理抗性的强弱等因子.表现在不同虫种间或同1处理的不同重复间,幼虫的感染及僵化率有很大的差异.
人们普遍认为虫草的完整外形与其药用价值极其相关,因此,国内外人士极其珍爱天然冬虫夏草.虽然已研究成功并大量生产发酵菌丝代替天然虫草,但是,它还不能完全代替和满足国内外市场对天然冬虫夏草的需求.国内外都在大力开展人工栽培冬虫夏草的研究,但由于冬虫夏草是由虫菌寄生在昆虫体内而形成的,天然虫草要求的气候条件及其生活史均较复杂,要完成人工栽培,需要同时解决寄主昆虫的饲养、虫草菌的培养及其形成冬虫夏草环境条件这3方面的问题,难度较大.
通过本试验发现幼虫的感染率达30%,有关虫草菌的感染机理尚待深入研究.
参考文献:
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Gao Zuxun.Study on All Arti fici al Culture of Cor dyceps sinensis[J].Journal of Zhejiang Agricultural U niversity,1990,7(1):1~5.
On Cordyceps sinensis(Berkeley)Sacc Infecting on
Temmibrio molitor Linne
PAN L-i mei1,JIA Chun-sheng1,WANG Min2,WANG Guang-fa3,LIU Chun-fu4
(1.For estry College o f Beihua University,J ilin132013,China;
2.G uide S tation f or Forest S ilkw or m o f H anj iang Region,Yangz hou225000,China;
3.Managing Dep ar tment of Baishishan Forestry Bur eau in J ilin Province,Jilin132503,China;
4.Dunhua For estry Bur eau,Dunhua133700,China)
Abstract:Cor dyceps sinensis(Berkeley)Sacc w as cultivated,purified and maken spore suspend the liquid.At the same tim e,host-insect Tem mibr io molitor Linne w as carried on artificial raise,inoculate infecting. Infecting rate of host form fungus core reached30%,infecting is resulted from several synthetical factors. Key words:Cor dyceps sinensis(Berkeley)Sacc;Infecting;T emm ibrio molitor Linne。