标本采集:空腹安静状态采血单独一管(促凝管)4ml-5ml参考值:1.血清β2-MG(β2微球蛋白)0-3mg/L(0.8-2.0)是反映肾小球滤过功能的较好指标肾小球滤过率(GFR)及肾血流量降低,则血清β2-MG升高。
尿液β2-MG(β2微球蛋白)↑1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标;2、鉴别上下尿路感染:上尿路感染时,β2-MG明显增高,而下尿路感染则正常。
2.血清hsCRP(C反应蛋白(CRP))0-3mg/L是反应炎症的敏感指标3.血清Cys C (半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C)肾移植术后肾功能的检测、监测化疗药物对肾功能的损害、诊断肾脏纤维化判断纤维化程度的一个重要指标1-14岁0.51-0.95mg/L14-50岁男0.63-1.25mg/L女0.54-1.15mg/L50岁以上0.60-1.55mg/L4.血清HA (血清透明质酸)0-110ng/ml血清HA浓度的变化,对鉴别急、慢性肾病及对肾病综合征与单部位损害的部位和程度,反映肾脏的病情变化有重要意义,对肾脏疾病诊断具有重要意义5.血清LN(层粘连蛋白)0-95ng/ml肝纤维化、肿瘤转移的最新指标6.血清PCⅢ(血清Ⅲ型前胶原)0-90ng/ml联合检测血清Ⅲ型前胶元(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)三项指标升高与肝纤维组织增生呈同步性,显示出良好的正相关(P<0.01)结论三项指标的联合检测可极大增加临床诊断7.血清C-Ⅳ(血清Ⅳ型胶原)0-85 ng/ml8.血清TIMP-1(血清组织金属蛋白酶抑制物-1)53-153pg/ml血清TIMP-1水平反映了慢性肝病肝内炎症和纤维化的一些重要特征,在目前情况下是一种较好的肝脏纤维化无创诊断和随访指标。
肾小管三项,包括尿β2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr肾纤维化标记物至少包括ECM成分及其裂解物、ECM代谢相关的酶、纤维化相关细胞因子和其他相关检测等四大类。
但实际上,目前尚无真正含义上的血清肾脏纤维化标记物,国内外研究较多的有以下几种,可用作肾脏纤维化的辅助诊断。
• 1.血清β2-MG• 2.血清hsCRP• 3.血清Cys C• 4.血清HA• 5.血清LN• 6.血清PCⅢ•7.血清C-lV•8.血清TIMP-1另外,在阻断肾纤维化的过程中,TGF-β,PDGF两项化验指标也是精确了解肾脏纤维化受损程度的重要指标。
正常表达时能抑制炎症和细胞增生、调节细胞的生长、分化和免疫功能而起正面作用;PDGF能诱导系膜细胞增生(系膜细胞既可产生PDGF,又可被PDGF作用)和肾小管间质纤维化。
血清组织金属蛋白酶抑制物-1(tissueinhibitors of metalloproteinases-I,TIMP-1)1.血清β2-MG ,2.血清hsCRP,3.血清Cys C ,4.血清HA,5.血清LN,6.血清PCⅢ,7.血清C-lV ,8.血清TIMP-1 及TGF-β(转化生长因子)、PDGF(血小板原性生长因子)、补体等相关检查。
该几项检查是针对对肾脏纤维化进展程度的特异性检查项目,一般医疗机构尚未开展。
显示患者仍有保守治疗的意义。
血清:层粘连蛋白(LN)Ⅳ型胶原(Ⅳ.C)甘胆酸(CG)透明质酸(HA)脯氨酸肽酶(PLD)血清Ⅲ型前胶元(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)人血清层粘蛋白(LN)ELISA定量检测1.试剂:(包被板和标准品需-20℃保存);其余4℃保存。
① LN包被板(内有保护液,使用前洗涤2次,剩余-20℃保存) 8孔×12② LN标准品:LN standard (2000ng/ml) 1管③标准品稀释液:Standard diluents 1瓶④ LN酶结合物:LN Enzyme tracer (1.1 ml) 1管⑤洗涤缓冲液:(10ml),用蒸馏水20倍稀释1瓶⑥显色液A / 显色液B(6 ml)各1瓶⑦终止液1瓶2.操作程序:3.结果判断:酶标仪A450nm测定。
酶标仪定量(设立程序)或电脑软件定量(公司提供软件)。
定量范围:15.0—1000.0 ng/ml,小于15.0时按15.0报告。
4.正常参考值:115.7±17.3ng/ml5.注意事项:A 包被板在使用前在室温溶解,洗涤2次扣干洗液使用,剩余者于-20℃保存,下次直接使用。
B 为保证检测质量,标准品若不能在1月内使用完,请直接保存在-20℃,反复冻融对不影响实验结果。
C自用户收到试剂开始,酶结合物在4℃保存2月内质量稳定,使用周期长者可于-20℃分装保存。
6.临床意义:肝纤维化、肿瘤转移的最新指标——层粘连蛋白(LN)o 层粘连蛋白(laminin, LN)是细胞外间质(ECM)中的非胶原糖蛋白,广泛分布于基底膜的透明层,紧贴细胞基底部,与IV型胶原结合形成基底膜的骨架,影响细胞的粘附、运动,调节细胞的生长和分化,并与肝纤维化发生、肿瘤的浸润、转移等有关。
肝纤维化时,LN基因过度表达,窦周间质细胞及胆管上皮细胞中的mRNA增加3倍左右,Disse间隙中LN含量增加10倍。
因此血清LN含量是反应肝脏纤维组织增生的良好指标。
此外,LN合成和沉积大大增加,形成特殊改变“肝窦毛细血管化”,与慢性肝病门脉高压发生有关。
癌症转移首先要突破基底膜,因而LN与肿瘤浸润转移有关。
o 正常人血清LN为115.7±17.3微克/毫升,慢肝(中度)>140微克/毫升,肝硬化>160微克/毫升。
正常人血清中LN浓度较低,肝纤维化时,血清中LN浓度明显升高。
其升高程度与慢性肝病肝纤维化程度一致,同时它也反映了肝窦毛细血管化的程度。
因为在正常肝组织中,肝窦无LN,但在肝纤维化时,LN和IV型胶原相结合,陈招灾Disse间隙,形成内皮基底膜,从而使肝窦毛细血管化,此既妨碍了肝细胞与肝窦间各种营养物质的交换,又产生门脉高压。
所以血清中LN升高程度与门静脉高压程度也是一致的。
o 综上所述,LN血清浓度升高程度不同,反映了肝纤维化的不同程度,当其显著增高时,常提示肝硬化的形成和门脉高压的存在。
但血清层粘连蛋白在其他非肝纤维化病人亦有升高,如肝癌、胰腺癌、肾病、糖尿病等,分析时应引起重视。
肝纤维化四项定量(ELISA一步法):人血清透明质酸(HA)人血清三型前胶原(PcIII)人血清四型胶原(IV.C)人血清层粘蛋白(LN)肾小管三项,包括尿β2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr尿β2-MG、尿液β2-MG(β2微球蛋白)↑1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标;2、鉴别上下尿路感染:上尿路感染时,β2-MG明显增高,而下尿路感染则正常。
尿NAG尿路感染进行N—乙酰—B—D—氨基葡萄糖苷酶(NAG)值的测定,上尿路感染的临床符合率为88%,下尿路感染的临床符合率为90%,认为尿NAG 酶可作为上、下尿路感染定位诊断的一项指标。
尿路感染的诊断,单凭临床症状及中段尿培养细菌计数每毫升尿在10万以上,只能说明是尿路感染,但不能说明是上尿路感染(肾盂肾炎),还是下尿路感染(膀胱炎)。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.30,N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶,相对分子量约有140000。
存在于所有组织中,以前列腺和肾近曲小管溶酶体含量最高。
NAG有多种同工酶,大多数组织有A和B型同工酶,少数组织含有微量的I、S、P型同工酶[1]。
按等电点由大到小的顺序依次为B、I、P、A和S型同工酶。
肾组织有A、B、I等3种同工酶,肾组织损伤时主要是尿NAG-B同工酶升高。
NAG同工酶由2种亚基组成,α和β。
NAG-S由2个α亚基构成,NAG-A由α和β亚基组成,而NAG-B、I、P都只含有β亚基[2~4]。
尿中NAG主要来源于肾脏本身,而不是来自血液。
糖尿病患者由于存在持续高血糖使非酶糖酰化速率加快,导致组织缺氧,血液粘滞度增高[1],同时内皮细胞释放内皮素、P-选择素等血管活性物质[2],使肾小球毛细血管张力变化,引起肾血流动力学改变,使肾小球处于高滤过状态引起肾损害。
本文通过定量检测尿中微量蛋白[包括白蛋白(mAlb),IgG],N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),探讨其在糖尿病肾损害中的临床价值。
1 材料与方法 1.1 检测对象(1)临床确诊的糖尿病患者152例,其中男85例,女67例,平均年龄43.2±15.5岁。
(2)对照组65例,健康献血员。
1.2 尿微量蛋白测定尿微量白蛋白及IgG采用酶免疫法(ELISA)测定,NAG采用终点比色法,试剂盒均由福建太阳生物技术公司提供,严格按说明书操作,各组间采用t检验统计结果。
尿中两种微量蛋白及NAG含量正常参考值上限为:mA1b<19 mg/L,IgG<5.0 mg/L,NAG<18.5 U/L,测定结果高于参考值上限者判断为阳性。
尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(N-Acetyl-β-glucosaminase,NAG),是广泛分布在哺乳动物身体各组织中,在人类,为泌尿系统所特有的酶。
肾干冻切片发现NAG几乎存在于近端肾小管细胞的溶体酶中,分子量约为14万,是一种重要的溶酶体酶,与粘多糖类及糖蛋白代谢有关,酶的活性最高值是在近曲小管(PCT),低值在小球(GF)、近端小管垂直部(PR)、髓袢上升支(MAL)和皮质集合管(CCP),膀胱粘膜含量最低。
在正常情况下尿液中可测得少量NAG,但在小管上皮细胞变性、坏死时,NAG活性显著升高。
尿中半乳糖苷酶(GAL)是一种广泛存在于人体组织细胞中的酶,属溶酶体酶。
以近曲肾小管含量较多,正常人尿中含量很低,当肾组织尤其是肾小管损害时,尿中含量明显上升。
由于它富含于新生态溶酶体中,肾损伤后修复时,它又可升高,所以它又是肾损伤修复的标志。
如果GAL 持续升高,则表明肾损伤处在修复过程中,说明愈后较好。
另外,临床上以NAG/GAL比值评价肾损伤的程度和愈后,优于单测NAG和GAL。
GAL/NAG比值越小,说明肾损伤越严重,愈后越差,反之,比值越大则提示肾损伤轻微或恢复。
一般GAL/NAG比值:尿毒症<慢性肾炎<肾病综合征和急性肾炎<肾炎恢复期。
动态观察NAG和GAL两者变化对肾疾患的诊断、鉴别诊断、治疗监测和预后评估有重要价值。
尿GGT/尿Cr尿微量蛋白(m-pro)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG酶)、r-谷氨酰转移酶(GGT)联合检测对早期肾脏损伤的诊断价值.方法:采用终点法检测尿微量蛋白总量、NAG酶以及尿肌酐(cr),速率法检测尿GGT.结果:正常对照组尿m-pro/cr为(7.05±5.8)mg/mmol,NAG/cr为(6.75±2.81)u/mmol,GGT/cr(23.64±15.88)u/mmol.尿蛋白定性阴性的糖尿病、高血压、系统性红斑狼疮患者尿m-pro/cr,NAG/cr,及GGT/cr较正常对照组增高(P<0.01).单项及二项检测m-pro,NAG,GGT这三项指标阳性率较低,将这三项指标联合检测在糖尿病、高血压和系统性红斑狼疮中阳性率分别达82.5%,75.8%和85.2%,大大提高了阳性检出率.相关分析表明m-pro,NAG和GGT呈显著正相关.结论:联合检测尿m-pro,NAG及GGT是诊断肾脏早期损伤灵敏、可靠的实验室指标.在人体各器官中,肾脏、胰腺、肝脏中γ-谷氨酰基转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)的含量之比约为100∶8∶4,肾脏中含量最高,但肾脏疾病时,血液中此酶增高并不明显,主要通过尿中排出[1]。