文献综述卵黄抗体的研究进展郑译西南大学荣昌校区动物医学系，重庆，荣昌402460摘要：抗体（免疫球蛋白，Ig）是指机体受到外来抗原物质刺激后，B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。

关键词：卵黄抗体；免疫程序；研究进展卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk，IgY）经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体，有研究证实[1]，产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用，使其不断储存于卵黄中，这种抗体称为卵黄抗体。

1 卵黄抗体的概念卵黄抗体，英文名（vitelline antibody）定义：从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。

禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG，其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。

卵黄抗体是用特定抗原多次免疫产蛋母鸡，使机体产生相应的特异性抗体，并转移、贮存在卵黄中，经提取纯化的免疫球蛋白卵黄抗体（Egg yolk antibodies eyAb），也称卵黄免疫球蛋白(Egg yolkimmunogbhin，IgY)。

科学家在鸟类的血液循环壁发现三种免疫球蛋白(IgG、IgA 与IgM)，母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋，母鸡血浆中之IgA与IgM，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。

IgG：免疫球蛋白G (Immunoglobulin G，IgG)的缩写。

IgG是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。

其中40～50％分布于血清中，其余分布在组织中。

IGA：一种免疫球蛋白。

异常情况下，在肾脏受到各种炎症反应刺激等因素下，导致IGA过度沉积在肾脏肾小球系膜区等部位，与抗原一起形成免疫复合物，造成肾脏结构病理损害，引起的一系列临床症状，称为IGA肾病。

IGM：免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)的缩写。

根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种，IgM是三种免疫球蛋白之一，其他还有lgA、lgG、IgD和lgE.。

2卵黄抗体的性质和特点2．1 产量高产蛋母鸡是高效率、高质量IgY的“生产工厂”。

产蛋母鸡经特定抗原免疫后，可产生持久性应答，效价可维持数月至1年以上。

卵黄中IgY的含量超过哺乳动物血清抗体含量。

每个卵黄的IgY含量可达100～250 mg(Leslie等，1969)。

2．2 性能稳定鸡IgY耐酸、耐碱、耐热，理化性质较稳定性。

Larsson等(1993)将IgY制剂在4℃条件下贮存5年或在室温下放置6个月，IgY抗体活性仍无明显下降。

Hatta等(1993)检测了3种主要消化道酶对抗HRV IgY的影响．将胃蛋白酶和IgY在pH=2条件下温育1 h 后，几乎所有IgY均丧失；而在pH=4条件下温育1 h后保持91％的活性，温育1O h后仍有63％的活性。

IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶温育8 h，活性分别保持39％和41％，这说明IgY对这3种酶有一定的抵抗作用。

2．3 安全性高王忠泽等(2002)用治疗剂量(80～300 mg／kg)的1O～4O倍进行试验，没有发现毒性反应。

美国食品和药品管理局(FDA)认为，卵黄免疫球蛋白作为食品比作为药物更有利，并将其列入“一般公认安全物质”范畴。

说明规范生产使用卵黄抗体是安全的。

2-4 免疫测定中干扰小IgY不能识别哺乳动物体内的补体和人Fc受体．不会和类风湿因子及HAMA (人抗鼠抗体)反应。

此外，IgY也不会和IgA和IgG结合，可避免这些因素所造成假阳性或假阴性结果。

2-5易获得，适用性广除上述理化特性外，IgY还有其他重要的生物学特性。

卵黄IgG浓度高于血清IgG，单个卵黄(约15 mL)含100 mg以上的IgY，自卵黄中获得IgY较实验动物血清方便，且免去实验动物采血的痛苦。

Y不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG) 结合；IgY还不与血清中的类风湿因子(RF)结合，可提高免疫学检测的准确性。

因而可用IgY检测粪便中的病毒，因为粪便中含有SPA，用IgY检测可避免假阳性结果。

IgY是独特的IgG同种型抗体，同时哺乳动物组织结构较禽类组织具有高度免疫性，IgY用于哺乳动物检测具有明显的优势。

许多高度保守的抗原，在哺乳动物中仅产生极小的免疫原性，却可用IgY进行区分。

因而在许多方面卵黄抗体可替代哺乳动物抗体。

2-6 绿色无害，没有残留IgY是禽蛋中天然存在的一种物质，化学本质是蛋白质，发挥作用后即可被机体作为营养物质分解利用，纯品不会残留任何有害物质。

用IgY抑杀病原体，作用对象直接准确，不会产生广谱抗生素使用后有益微生物也被一起杀死、致使机体内微生物区系失调、引起继发反应的现象；使用IgY治病，病原微生物不会产生抗药性，不存在给动物用药而影响人类药物治疗效果的问题。

多数禽类病原菌对哺乳动物无致病性IgY成为疾病传播媒介的可能性比哺乳动物血清抗体小；与基因工程抗体相比，IgY的生产过程是一个纯天然过程，不需使用肿瘤细胞系等可能造成潜在危险的物质，因此使用禽IgY基因工程抗体更安全。

3．1 制造用鸡的选择选40—50日龄SPF鸡，用通过SPF鸡传代的野毒滴鼻、点眼，每只鸡接种0．2—0．3mL，在48～72h左右死亡的鸡，无菌采集其法氏囊，并作病变观察，将病变典型的法氏囊低温保存备用。

3．2 疫苗免疫通常使用组织灭活苗，其制备过程如下：3．2．1 制苗取lOg病料加10OraL0．5％甲醛生理盐水，匀浆、冻融、过滤，滤液加8％甘油，置37~C18—24h灭活，即为水剂灭活苗，也可加白油等佐剂，制成油乳剂灭活苗。

3．2．2 无菌检验取灭活苗0．5mL接种于普通琼脂斜面及厌氧肉汤培养基各一支，于37~C培养48h，应无菌生长。

3．2．3 安全试验及保护试验经无菌检验合格的灭活苗，肌肉注射、滴鼻、点眼，接种0．3—0．5mL，观察半月，可用1：10强毒0．5mL／只攻毒，观察10～l4天，无发病者为安全有效。

免疫程序：第一次免疫，每只鸡肌肉注射lmL，经7一l0天后进行第二次免疫，每只鸡2mL，7天后用琼脂扩散方法测定IgY效价，如已达到1：64以上，即可收集高免蛋，如效价不高，可隔7—1O天进行第三次加强免疫。

3．3 高免卵黄抗体的制备3．3．1 高免蛋的处理高免蛋用0．I％新洁尔灭溶液浸泡5分钟，洗涤干净，放人无菌室晾干备用。

3．3．2 分离卵黄无菌操作，打破蛋壳，分离蛋黄。

4．3．3 卵黄匀浆收集的蛋黄置无菌的组织匀浆器中，加等量灭菌生理盐水，并按每毫升加入青霉素、链霉素各1000单位，硫柳汞1．O／万，匀浆、过滤，分装消毒瓶内，4℃冷藏备用。

3．3．4 高免卵黄抗体的检验无菌检验：取0．5mL高免IgY，分别接种于普通琼脂斜面和厌氧肉肝汤培养基，37cI=培养24—48小时，应无细菌生长。

安全检验：取30日龄健康鸡1O只，每只鸡肌注IgY2mL，观察5—7天，应无任何不良反应。

卵黄抗体效价测定：用琼脂扩散反应测定，抗体效价应在1：64以上。

1．诊断如上所述，卵黄抗体较哺乳动物抗体具有明显的优势，诸如不与补体、Fc受体、SPA、SPG RF等结合，同时避免动物采血的痛苦，受到实验动物保护者的欢迎。

因而越来越多的人倡议用卵黄抗体取代高免血清，将来会有更多的IgY被用于制备免疫学诊断试剂。

目前国外关于此方面的报道较多，而国内相对较少。

据报道卵黄抗体已在琼脂扩散试验、乳胶凝集试验、荧光免疫试验、ELISA等免疫学试验中应用于检测细菌、病毒、寄生虫、酶、激素、免疫球蛋白、受体、红细胞抗原等。

如Davalos P L等报道利用IgY乳胶凝集方法和IgG蛋白吸附和解吸附、等电点、电动迁移率和胶体稳定性进行比较，证明IgY更有效，IgY比IgG更疏水，而且IgY包被的胶体分散颗粒比IgG更稳定。

Cipolla A等分别利用IgY和IgG检测胎儿弯曲菌，IgY显色背景较浅，两者检测阳性率相近，但IgY比较简单易行。

Staak C所述IgY用于以下常规诊断：(1)通过血蝇昆虫的腹腔血液检测宿主种：(2)利用ELISA检测马媾疣(3)FITC标记Ig 检测狂犬病；(4)FITC标记IgY检测禽病毒病，如NDV／IBV~BDV等。

DuP．DH等利用间接夹 t~'ELISA能检测8 ng非洲马瘟病毒，马瘟单抗包被后加入病毒抗原，然后加入抗马瘟IgY个斗l作为二抗，再加入抗IgY酶标绵技l羊抗体进行检测。

Hommel U 等动I利用鼠IgG或IgM免疫蛋鸡制备I IgY，作为鼠单抗检测中的二抗，Calzado G E 等报道应用抗人IgG的IgY制备特异性的Coombs试剂，利用人红细胞抗原免疫鸡制备IgY用于鉴定人血型系统2．疾病防治卵黄抗体应用于疾病防治的报道较多，范围也非常广泛，在动物、植物和人类疾病防治中均见报道。

(1)禽的病原鉴于卵黄抗体来源于产蛋母鸡，因而卵黄抗体应用于禽病防治是研究最早、应用最广泛的。

国内目前制备的卵黄抗体多数针对禽病防治，主要有抗新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、减蛋综合症病毒、鸡脑脊髓炎病毒、鸡病毒性关节炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒等。

通常应用卯黄抗体防治的病毒血清型比较单一，卵黄抗体经肌注后吸收进入血液，中和血液中的病毒，达到治疗的目的。

这种被动免疫疗法作用较快，但作用时间短，只能应用于紧急治疗。

在应用过程中应防止卯黄抗体本身携带污染病原，避免使卵黄抗体成为新的传染源。

(2)猪的病原在猪的病原中，目前报道制备卵黄抗体的主要是引起胃肠道疾病的病原，特别是引起仔猪腹泻的病原，如产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、轮状病毒等。

如Yokoyama H等制备的抗ETEC(K88、K99、987P)卵黄抗体；肖池等和李学伍等制备的抗ETEC卵黄抗体；Kweon C等制备的抗PEDV卵黄抗体；本实验室制备的抗ETEC (K88、K99、987P)、TGEV、PEDV混合卵黄抗体。

这些卵黄抗体在实验室和临床试验均证实具有明显的治疗效果。

(3)牛的病原与猪的病原类似，针对牛病原的卵黄抗体主要用于治疗犊牛腹泻。

如Kuroki M 等制备的抗牛轮状病毒卵黄抗体Yokoyama H等制备的抗犊牛沙门氏菌卵黄抗体等。

卵黄抗体I：1服应用于犊牛，能增强犊牛肠道局部免疫力，防治犊牛肠道传染病。

(4)人的病原Sarker SA等制备的针对轮状病毒的卵黄抗体应用于颓生婴儿腹泻的治疗具有明显的效果；Amaral JA等应用卵黄抗体治疗因EPEC病原引起的腹泻；Ji—Hyun Shin 等应用卵黄抗体治疗因幽门螺旋菌引起的胃炎。