２２ 红 细 胞 凝 集 试 验 ．
廖文军 等制备 了抗人 红细胞 单链抗 体一 伪狂 猪 犬病 病毒 ｇ Ｅ蛋 白双功能融合蛋 白， 以该双功 能融 并 合蛋 白为诊断抗原 ，建立检测猪伪狂犬病抗体 的红 细胞凝集试验方法［ ６ １ 。该方法检测 Ｐ Ｖ标准 阳性血 Ｒ 清反应 出现 肉眼可 见的凝集现 象 ， 而检 测 Ｃ Ｆ 猪 Ｓ Ｖ（ 瘟病毒） Ｐ Ｖ （ 、Ｐ 猪细 小病 毒） Ｐ Ｒ Ｖ （ 蓝耳病病 、Ｒ Ｓ 猪 毒） Ｊ Ｖ（ 、Ｅ 乙脑病 毒） 猪 布 氏杆菌 阳性 血清 和 Ｐ Ｖ 、 Ｒ 收稿 日期 ：０ ３ ０ — ４ ２ １— ６ ２ 基金项 目： 州市应用技术研究与开发专项 （０ ７ ６ ； 滨 ２ ｏ ０ ） 山东省 自然 ｇ Ｅ缺 失疫苗 接种猪 的免疫 血清 均不 出现红 细胞凝 科 学基－ Ｚ ２ １Ｃ ０ ２ ￣（ Ｒ ０ ２ Ｑ １ ） 集现象 ，与美 国进 口的 Ｐ Ｖ ｇ — ＬＳ Ｒ Ｅ Ｅ ＩＡ抗体诊 断试 作者简介 ： 祖立闯（９ １ ）男， １８ 一 ， 黑龙江宾县人 。 助理研 究员， 硕士 ， 主 剂盒的符合率为 １０ ０ ％。该方法操作简便 、 敏感性和 要从事兽 医免疫学诊 断技 术研 究． ｍ ｉ ｕ ｃｕ ｎ＠１６ ｏ Ｅ ａ： ｌｈａｇ ２ ．ｒ — ｌ ｉ ｚ ｃｎ
猪伪狂 犬病 （ｓｕ ｏａ ｉ ． ） 由猪伪 狂犬病 Ｐｅｄ ｒ ｅ Ｐ 是 ｂ ｓＲ 病 毒 （ｓｕ ｏａｉｓ ｉ ｓ Ｒ ） Ｐ ｅｄｒｂｅ ｒ ． Ｖ 引起 的一 种 急 性 、 ｖｕＰ 热 性、 高度接触性猪传 染病 ， 以发热 、 脊髓炎 、 脑 奇痒 、 呼吸和神经系统障碍 为主要特 征， 具有传播 范围广 、 传播途径 多、 发病快 、 死亡率高 、 病原体顽 固等特 点。 目前 Ｐ 已呈 世界性分布 ， 且流行愈来 愈严重 ， Ｒ 而 给 全球养猪业造成 巨大 的经济损 失，世界动物 卫生组 织将 其列为 Ｂ类传 染病 ， 国农业部 兽医局也将 其 我 列 为二类传染病 ，是 目前严重危害我 国养猪业健 康 发展 的重要疾病之 一ｌ Ｒ ｌ 】 Ｖ属疱 疹病 毒科 一 。Ｐ 疱疹 病毒亚科 ，具有疱疹病 毒的典型特征 。Ｐ Ｖ的 ｇ Ｒ Ｅ、 ｇ 、Ｉ Ｋ等毒力基 因是复制 非必需基 因， Ｇ ｇ、 Ｔ 其编 码的 蛋 白为非必 需糖蛋 白，缺 失这些基 因后 ，Ｒ Ｐ Ｖ毒力 将 明显减弱 ， 但其抗 原性 并不受 影响 目前 ， 内 。 国 外 已广泛 使用 Ｐ Ｖ基 因缺失 弱 毒疫 苗进 行 Ｐ 的 Ｒ Ｒ 防控 ，且欧美等发达 国家 应用 Ｐ Ｖ ｇ Ｒ Ｅ基 因缺 失疫 苗及 其 配套 的鉴 别诊 断方 法 已经实 现 了 Ｐ 的净 Ｒ 化，我国 目前 已广泛使用 Ｐ Ｖ基 因缺 失弱毒疫苗 ， Ｒ 且 国内学者 已建立 了诸 多鉴别 诊断方 法 。近 年来 ， 随着免疫学和分子生物学技术的不断发展 ，Ｒ相关 Ｐ 的血清学和分子生物学诊断方法也不断完善 ，本文 就近 年来猪伪狂犬病的常用诊断方法进行最新 的全 面概述 ，为不同实验室尤其是基层兽医单位寻找适 合 自身 的诊断方法 、 制定合理 的免疫程序提供参考 。 １ 病毒分离 病毒分 离方法准确 、 可靠 。杨庆 芳等将无 菌采 集的病死仔猪和流产胎儿 的脑 、 、 、 、 肺 肝 脾 肾等组织 病料接种 Ｂ 一 １ ＨＫ ２ 单层细胞培养 ，盲传 ４代后 出现 典型细胞病变 ， 收获分离株病毒 ， Ｂ Ｋ ２ 细 胞测 用 Ｈ 一１ 定 分离 株 病毒 毒 价 的 Ｔ Ｉ 轴为 １ －４０１ｍＬ Ｐ Ｒ ＣＤ ０￣２ ． ｏ ，Ｃ ／ 鉴定 结果分离株病 毒为 Ｐ Ｖ３ Ｒｔ １ 。魏春华等 将福建 省 某猪场疑似 Ｐ Ｖ感染 的 ３日龄 发病仔猪 的脑 、 Ｒ 肺脏 等组织接种 Ｐ 一 ５细胞 ，６ｈ后 出现 圆缩 、 聚 、 Ｋ１ ３ 集 脱 落等 典型的细胞病 变 ，Ｒ Ｐ Ｖ阳性血清能特 异性 中和 该分离株病 毒 ，该病毒接种 家兔 出现 典型的 Ｐ Ｒ症 状ｔ ４ １ 。病毒分离方 法虽然准确 ， 但试验 周期较 长 、 需 要 专业技术水平较 高的细胞培养人 员，且分离 到的 病毒还需要 电镜、 Ｃ 、 中和试验等方 法进行鉴定 。 ＰＲ 该方法不适合在基层兽 医单位推广应用 。 ２ 血清学诊断方法 血清学诊 断方法 的基本 原理 是抗原与抗体 的特 异性反应 ，可根据 已知抗 原建立检测抗 体的诊断方 法， 也可根据 已知抗体建立检测抗 原的诊 断方法 。
２ ６０ ；． ５ ６ ０ ２山东省滨州 畜牧 兽医研 究院， 山东 滨州
文章编号 ：０ ２ １５ （０ ３０ — １４ ０ １０ — ９ ７２ １）４ ０ ２ — ４
２６０） ５ ６ ０
文献标志码 ：Ａ
摘 要： 随着 免疫学 与分子 生物学技术的 日臻进 步 ， 伪狂犬病 的血清 学和 分子生 物学诊断方 法 猪 不 断完善。本文就近年来猪伪狂 犬病 的病毒分 离 、 清学和分 子生物 学诊 断方法的最新研 究进展 血 以及各种诊 断方法 的优缺 点进行全 面概述 ， 在 为不 同实验室尤其是基层兽 医单位寻找适合 自身 旨 的诊 断方法、 制定合理 的免疫程序提供 参考。 关键词 ： 猪伪狂 犬病 ； 断方 法； 诊 概述
２１ 中 和 试验 ． 中和试验 （ｅｔ ｌａ ｏ ｓＮ ） Ｐ ｎｕｒ ｉ ｔ ｎｔ ｔ Ｔ 是 Ｒ抗体的经 ａｚ ｉ ｅ 。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
典检测方法 ， 也是世界上 多数 国家检测 Ｐ Ｒ抗体的法 定检测 方法 ，当建立其它 新的检 测方法 时都需要与 该方法进行 符合率 比较试 验。中和试 验的基本操作 步骤 是将 定量 的 Ｐ Ｖ与连续倍 比稀 释 的血清 等量 Ｒ 混 匀后 ， ３ 置 ７℃中和 １ ｈ以上 ， 接种于 ９ ６孔微 量培 养板上 的 Ｐ 一 ５ Ｋ １ 单层细胞 ， 继续培养， 观察细胞病变 特征 ，以能完全 中和病毒 的血清 最高稀 释度的倒数 为该血清 的中和效价 ， 中和效价 大于或等于 １ ： ２时判 为阳性。 方六 荣等用 中和试验方法进行 Ｐ Ｒ的血清学 调查 ， 结果显示 ， 中和试验方法 的特异 性很强 ， 但敏 感性较低¨ 中和试验 由于操作繁琐且受细胞等条件 引 。 的限制， 同样不适合在基层兽医单位推广应用 。
１４ ２
养 猪 Ｓ Ｎ Ｒ ＤＵ Ｔ Ｏ ４ ＷＩ Ｅ Ｐ Ｏ Ｃ Ｉ Ｎ（）
２ ｌ ０３
猪 伪 狂 犬 病 常 用 诊 断 方 法 概 述
祖立闯 ， 王金 良 ，苗立中 ．李 峰 ， ， 一 ， 一 ，沈志强・ 一 ， ２
（． １山东绿都生物科技有 限公 司， 山东 滨州
中图分类号 ：８ ８ ８ ． ￥ ５ ． ５３ ２