当前位置:文档之家› 脱钙方法总结

脱钙方法总结

缺:
(1)该液对细胞核作用较慢,使细胞核着色较差。
(2)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少12小时。
4.Perenyi’s液:
10%硝酸4份,0.5%铬酸3份,无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点:
(1)该液是一种暖和的脱钙液,可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点:
(1)细胞核染色相当好。
(2)不需要水洗,脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点:使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6.甲酸液:
甲酸10ml,10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点:
(1)脱钙同时可以对组织固定。
(2)对细胞核染色比较好。
(2)细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
(3)推荐该液作为常规脱钙使用。
(4)组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点:
(1)脱钙较慢,因此,紧急情况下不能使用。
(2)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5.Von Ebener’s液:
饱和水溶液氯化钠50ml,蒸馏水50 ml,浓盐酸8 ml。
9.AFIP甲酸-柠檬酸钠液:
A液:甲酸25ml,蒸馏水25ml。B液:枸橼酸钠(结晶)10g,蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合,每日换1次,因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合,具有促进脱钙的作用。
10.蒋维中(Jangweizhong’s)液:
盐酸80ml。甲酸70ml,三氯化钙50g,冰醋酸25ml甲醛100ml,生理盐水900ml。
缺点:脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
3.福尔马林-硝酸液:
40%甲醛5ml,浓硝酸10ml,蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。
优点:
(1)福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
(2)该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
(3)可作为紧急活检脱钙用。
(4)该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
EDTA-2NA脱钙:EDTA20g,双蒸水100ml,加NAOH充分搅拌溶解,用HCL调节pH至7.4左右。将骨组织放入微波炉专用盒,放入脱钙液,低温脱钙,也可以在微波下20--50℃间歇脱钙,每次循环辐射2分钟,以30个脱钙循环作为最佳脱钙终点。在各循环间从微波炉中取出标本盒,室温冷却。
优点:耗时短,容易控制。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少24小时。
(4)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
2.硝酸水溶液:
浓硝酸5-10ml,蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。
优点:
(1)硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
(2)对组织损害较少,细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
(3)组织可直接通过70%乙醇去除酸。
目前所用的脱钙法主要见于下列:
1.硝酸-间苯三酚液:
浓硝酸10ml,间苯三酚1g,通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸100ml。
骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。
优点:该液脱钙速度非常快,大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点:
(1)细胞核染色很差。
(2)假如脱钙时间太长对组织有较大的损害。
(3)推荐用于小块组织和牙齿脱钙。
缺点:
(1)脱钙比较慢,不推荐作为常规标本脱钙使用。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少18小时。
7.三氯醋酸液:
三氯醋酸5g,10%福尔马林盐95ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要5-8天。
优点:
(1)对细胞核染色好。
此液脱钙迅速,0.5cm厚的松质骨6-20小时就可以完成脱钙。对组织影响极小,染色效果好。配制简便,脱钙后不需要用碱性液中和。
(二)螯合脱钙剂脱钙法
EDTA是一种良好的脱钙液螯合剂,它对组织破坏极小,不产生气泡,不影响染色,假如加温至37℃,可以加快脱钙速度。
1.EDTA脱钙液:
乙二胺四乙酸(EDTA)5.5g,10%中性福尔马林100ml。
缺点:脱钙尽可能用低温,不适宜高温修复,可以直接进行免疫组化。有研究显示,4℃EDTA脱钙骨组织以及抗原成分保持完整,表明低温EDTA脱钙效果好,阳性高。同时显示,常温或者加热的标本免疫组化时可能会造成抗原丢失,导致假阳性和染色背景深。
(2)脱钙之后不需要水洗,酸乙醇可以去除。
缺点:
(1)脱钙作用慢,仅仅推荐用作骨的细针脱钙。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
8.Flemming’s液:
1%铬酸15ml,2%四氧化锇4ml,冰醋酸1ml。
Flemming’s液虽然是一种固定液可作为微细骨针脱钙用。液体需要新鲜配制,并在容器底部会形成沉淀。脱钙后假如直接通过乙醇可以形成不能溶解的色素。脱钙之后标本必需充分流水冲洗去除过多的铬盐。使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。用苏木精染色时细胞核受抑制。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要7-21天。
优点:
(1)经EDTA脱钙的组织染色结果好。
(2)对组织的结构损害小。
(3)用化学方法测试可以确定脱钙的终点。
缺点:
(1)脱钙速度相当慢,不适合常规标本脱钙使用。
(2)脱钙后组织会稍微变硬。
2.EDTA+NAOH脱钙法:
固定剂宜用福尔马林或多聚甲醛固定4—12小时。
相关主题