酶学分析方法及酶活性测定复习与练习一、有关酶的基本理论知识1、酶浓度与酶促反应速度的关系是？2、底物浓度与酶促反应速度的定量关系式是？3、影响酶促反应速度的因素主要有哪些？4、Km及Vm代表的含义及它们在临床酶活性测定中应用及意义。
二、酶活性测定的基本知识1、酶活性的概念及酶活性单位如何表示表示2、目前酶活性单位有-------、----------、-------------三种表示方式。
？3、解释酶活性国际单位、催量（Katal）的概念，并比较两者的关系？4、酶活性单位的计算：几类计算公式要求理解并熟练应用。
1）通用公式2）惯用单位的计算公式（测定产物生成类的计算公式；测定底物消耗类的计算公式）3）**连续监测法根据摩尔吸光系数进行酶活性浓度的计算；**连续监测法因素F值（全自动化生化仪多用K表示）的计算和应用？三、酶活性的测定方法1、酶活性测定的基本原则是什么？2、酶反应时间进程曲线有————、—————、————三个时期酶活性测定是在————期测定，此时期反应速度不受------------的影响也称------期3、根据反应时间，酶活性测定分为两类方法是---------和--------------两种从概念、结果计算、优缺点叙述并比较两类方法？其中连续监测法4、按检测对象的酶活性测定方法分为----------和------------法；其直接法的方法类型有哪些？5、何谓酶偶联反应？写出酶偶联反应的基本模式？什么是待测酶、辅助酶、指示酶？6、何谓工具酶？酶作为工具应用于临床生化检验可进行酶活性测定或进行代谢物浓度（底物）的测定时一般有哪两大指示系统？何谓-Trinder反应？Trinder反应的主要缺点或影响因素有哪些？7、何谓同工酶？同工酶分析的常用原理有哪些？检测同工酶有何临床意义？并举例说明？8、酶活性测定条件及影响因素有哪些？9、从几个酶类测定（如AMY、ALT、LD、ALP|等）的实验操作中，讨论酶活性测定应注意的问题？10、试述影响血清酶的生理变异有哪些？11、酶活性测定，标本的采集、处理、贮存及样品试剂比有何要求？四、体液酶测定：1、常用于临床协助诊断的血浆酶有哪些？用于协助诊断心肌损伤、肝脏疾病、胰腺疾病、骨骼骨骼肌、前列腺疾病等的常用的血清酶有哪些？常用的临床诊断酶谱有哪些？2、将各血清酶活性测定的方法学原理进行分析归纳，请总结出有哪几大反应基础。
3、书写出AMS、ALP两种（化学比色法、（连续监测法）方法及ALT、AST、GGT、LDH、CK酶测定（连续监测法）反应原理、主要试剂成分和作用？影响结果准确性因素有哪些？评价LD-L反应和LD-P反应试剂盒的优缺点？4、血清ALT、AST、ALP、GGT、AMS、CK、LD等酶测定的临床意义？五、选择题：A 1、K m是指反应速度为最大反应速度一半时的A 底物浓度B 酶浓度C 激活剂浓度D 温度E 抑制剂浓度D 2、根据1976年国际生化学会生化委员会规定，酶的一个国际单位是指A 最适条件下，每小时催化生成1mmol/l产物的酶量B 最适条件下，每分钟催化生成1mmol/l产物的酶量C 最适条件下，每小时催化生成1umol/l产物的酶量D 特定条件下，每分钟催化1umol底物产生变化所需的酶量E 25℃及其它最适条件下，每分钟催化1umol底物产生变化所需的酶量E 3、IFCC推荐法测定AST的辅助酶是A G6PDB HKC POD D LDHE MDHB 4、以NAD（P）或NAD（P）H为指示系统的酶活性测定主波长应设置为：A 293nmB 340nmC 405nmD 380nmE 500nmD 5、以ＮＡＤ还原为ＮＡＤＨ反应为基础的生化分析，采用波长及吸光度变化为：Ａ、340nm Ａ下降Ｂ、405nm Ａ上升Ｃ、500nm Ａ下降Ｄ、340nm Ａ上升Ｅ、405nm Ａ下降A 6、淀粉酶测定显著升高主要见于：Ａ、溃疡病穿孔Ｂ、急性胰腺炎Ｃ、甲亢Ｄ、糖尿病Ｅ、肾病综合症C 7、正常成人血清LD同工酶电泳区带的结果应符合：A LD1>LD2>LD3>LD4>LD5B LD1<LD2<LD3<LD4<LD5C LD2>LD1>LD3>LD4>LD5D LD3>LD1>LD2>LD4>LD5E LD4>LD1>LD2>LD3>LD5B 8、IFCC推荐法测定ALP选择用哪种缓冲液A 乙二胺B AMPC TrisD 甘氨酸E 二乙醇胺C 9、单底物酶促反应的最适底物浓度的确定原则：A 1KmB 2KmC 10~20KmD 100KmE 越大越好B 10、前列腺疾病最敏感的指标是：A ALPB ACP D CHE D AMY E ASTC 11自动化生化分析仪测定酶活性常用计算K值的主要原因是A 方便B 准确C 无标准品和校正品D 酶校正品不准确D 12、GPT测定时，底物液中的α酮戊二酸的量比丙氨酸的量小近百倍的原因是A 防止酶促反应时，丙酮酸生成过量B 保证酶有足够的底物C 防止基质中PH小于7.4D 减少α酮戊二酸与2．4二硝基苯肼的呈色反应E α酮戊二酸过多可激活酶的活性D 13、AST测定（速率法）的试剂中，不含有A 天冬氨酸B NADHC α－酮戊二酸D 丙氨酸E Tris缓冲液C 14、酶联反应中最后一个外加酶称为：A 偶联酶B 辅酶C 指示酶D 工具酶E 同工酶D 15、ALP测定（King法）其底物是A 铁氰化钾B 酚C 4－AAPD 磷酸苯二钠E 丙氨酸B 16、血清ＡＬＴ测定中，标准曲线为抛物线的干扰物为Ａ丙酮酸Ｂ２．４－二硝基苯肼Ｃ谷氨酸Ｄａ－酮戊二酸Ｅ２．４－二硝基苯腙B 17、ＡＬＴ测定（Ｒ－Ｆ）终止酶促反应是用Ａ０．４mol／ＬＮaＯＨＢ２．４二硝基苯肼Ｃ a－酮戊二酸２．４二硝基苯腙Ｄ磷酸盐缓冲液Ｅ碳酸盐缓冲液A 18、血清ＡＬＴ测定（Ｒ－Ｆ法），下列哪些情况会导致结果偏低：Ａ制作标准曲线所用的丙酮酸钠变质Ｂ标本严重溶血Ｃ对照管混浊未被发现Ｄ水浴温度偏高（升至５０℃）Ｅ血清与基质混合匀后未及时放入３７℃水浴保温A 19、１００n Kat单位酶量等于Ａ６ＩＵＤ２７８ＩＵＢ２７．８ＩＵＥ１６６７ＩＵＣ１６６．７ＩＵE 20、根据米氏方程，不符合[S]与Km的关系的是A 当[S]＞＞Km时，反应速度与底物浓度无关，成零级反应B 当[S]＜＜Km时，反应速度与底物浓度成正比，成一级反应C 当[S]＝Km时，V＝Vm／2D 度量两者的单位是相同的E 当[S]＝Km／3时，V＝67％VmA 丙氨酸+α酮戊二酸→丙氨酸+谷氨酸B 天冬氨酸+α酮戊二酸→草酸乙酸+谷氨酸C 肌酸+ATP →磷酸肌酸 + ADPD 丙酮酸 +NADH →乳酸 + NADE 草酸乙酸 +NADH →苹果酸 + NADB 21、AST催化的反应D 22、LDH催化的反应C 23、CK催化的反应Ａ磷酸苯二钠Ｂ铁氰化钾Ｃ４－ＡＡＰＤ酚Ｅ碱性试剂B 24、ＡＬＰ（Ｋing）测定氧化剂C 25、显色剂D 26、标准物A 27\ 底物A ALTB ALPC GGTD AMSE CK-MBA 28、肝细胞急性损伤最好的指标C 29、肝占位性病变D 30、急性胰腺炎E 40、心肌梗死B 41、骨骼疾病A NAD（P）H指示系统B POD指示系统C 两者均有D 两者均无C 42、葡萄糖测定C 43、TG测定B 44、胆固醇测定B 45、尿酸测定D 46、尿TP测定（ALT AST 胆汁酸胆红素、肌酐等）A 平衡法B 速率法C 两者均有D 两者均无A 47、GOD-POD测葡萄糖B 48、碱性苦味酸法测肌酐C 49、GLDH测尿素A 酶试剂法测定B 离子选择电极法测定C 两者均有D 两者均无C 50、血清钠、钾测定C 51、血清氯、钙的测定A 52、血清磷的测定D 53、血清总蛋白、清蛋白测定A 54、血清ALT、AST测定ABCD 55、酶偶联方法测定酶活性的有：A ALTB ASTC CKD AMYE LDHABCD 56、下列哪些因素影响酶活性的测定A 缓冲液的种类和离子强度B PHC 反应温度D 激活剂浓度E 比色皿光径BC 57、酶促反应指示物的检测波长为405nm的有A NADHB 4-硝基酚C 5-氨基-2-硝基苯甲酸D 磷钼酸E NADPH ABCD 58、ＡＬＴ测定时，ＵA-ＢA的意义有Ａ消除２．４－二硝基苯肼溶液的Ａ值Ｂ消除a－酮戊二酸－２．４－二硝基苯腙的Ａ值Ｃ消除血清色素的干扰Ｄ消除血可能存在的酮酸的干扰BC 59、属于Trinder反应的色原物是:A H2O2B 酚C 4-AAPD PODE CODACDE 60．以下说法正确的是A．当[S]＜＜Km时，反应速度与底物浓度成正比，成一级反应B．当[S]＞＞Km时，反应速度与酶浓度成正比，酶促反应呈一级反应C．零级反应时V=Vman=K[E]D．一级反应是用工具酶测定各种代谢物浓度的方法学基础E．零级反应是用于测定酶活性或浓度的方法学基础ABCD 61．溶血时对测定结果有影响的血清酶是A、CKB、LDC、ALTD、ASTE、GGTABE 62、ALP活性升高可见于A、多发性骨肿瘤B、骨折 C 贫血D、甲低E、阻塞性黄疸AE 63、G6PD可用于测定A、葡萄糖B、淀粉酶C、乳酸脱氢酶D、碱性磷酸酶E、肌酸激酶ACDE 64、下列代谢物与其酶法测定所用试剂的组合，正确的是A、尿酸—尿酸酶—过氧化氢酶B、葡萄糖—葡萄糖氧化酶—葡萄糖-6-磷酸脱氢酶C、尿素-尿素酶-谷氨酸脱氢酶D、三酰甘油—脂蛋白脂肪酶—甘油激酶E、胆固醇—胆固醇氧化酶—过氧化物酶ABDE 65、下列酶活性测定描述正确的是A、可测定产物的生成量B、可测定底物的消耗量C、与底物浓度无关D、需最适温度E、需最适的酸碱度补充选择题：A 1当底物浓度大于Km时，此时的反应速度为A．零级反应B．一级反应C．二级反应D．混合级反应E．无法确定反应级D 2、为保证酶动力学分析，底物浓度最好是：A．0.5Km B．2Km C．2~5Km D．10~20Km E．100Km3、连续监测法测定ALT所用的底物通常是：对硝基苯酚磷酸钠C 4、测定下列哪种血清酶有助于鉴别ALP的来源A．ACP B．AMS C．GGT D．LD E．CKB 5、疾病时血清及尿液淀粉酶升高，应除外：A．急性胰腺炎B．肝炎C．肠梗阻D．急性腮腺炎E．溃疡病穿孔其它练习：1、以NAD+还原为NADH反应为基础的生化分析,采用波长是___________nm, 吸光度变化为________________. 当测定时其S:R=1:20时(酶速率法) 结果计算是IU/L=△A/min ×factor, factor为_____________（附NADH在340nm毫克分子吸光系数为6．22）2、ＳＧＰＴ测定中底物成分要求ＤＬ丙氨酸的浓度为２００mmol/L a－酮戊二酸浓度为２mmol/L，现欲配制５００ml底物，各应取多少mg？（ＤＬ丙氨酸ＭＷ＝８９， a－酮戊二酸ＭＷ＝１４６）3、ＣＫ测定实验原理中酶联的催化顺序＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。