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透射电镜生物样品制备步骤

透射电镜生物样品制备步骤
一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。

用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
1%锇酸固定液固定2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次
三.脱水:
50%乙醇15-20分
70%乙醇15-20分
90%乙醇15-20分
90%乙醇90%丙酮(1:1)15-20分
90%丙酮15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温15-20分三次
四.包埋:
纯丙酮+包埋液(2:1)室温3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温过夜
纯包埋液37度2-3小时
五.固化:
37度烘箱内过夜
45度烘箱内12小时
60度烘箱内48小时
六.超薄切片机切片70 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜JEOL JEM-1230(80KV)观察。

拍片。

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