血清总胆固醇酶试剂法测定法
1.实验原理
胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。
反应式如下：
CHE
胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸
CHO
胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2
POD
2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2
6.1.1 试剂准备试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。
12. 参考值范围（mmol/L）
合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸
收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。
血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。
脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。
LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。
四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。
低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。
即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。
HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。
事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。
进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。
近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。
14. 操作性能
14.1 线性范围：0.08～19.4mmol/L。
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
样品1 2.79 0.046 1.65 样品1 2.69 0.031 1.15 样品2 6.10 0.037 0.61 样品2 5.46 0.066 1.21 样品3 6.57 0.041 0.62 样品3 6.34 0.059 0.93 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂
盒(x)，同时对78个样品进行CHOL检测，将检测结果作
方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.065mmol/L；
r =0.995。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.08mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围：0.08～19.4mmol/L。
15. 超出范围结果处理：本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。
当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
16. 病危报警值的处理：高度危险范围>6.2mmol/L。
17. 方法局限性
17.1 本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。
当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤2840μmol/L，胆红素浓度≤342μmol/L，血红蛋白浓度≤2.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献
1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids,
lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical
Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61.
2.Recommendation of the Second Joint Task Force
of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503.
3.Artiss JD, Zak B. Measurement of cholesterol
concentration. In: Rifai N, Warnick GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:99-114.
4.Deeg R, Ziegenhorn J. Kinetic enzymatic method
for automated determination of total cholesterol in serum. Clin Chem 1983;29:1798-802.
5.Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid disorder. In Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:25-48
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。