待测物 酶标记抗体
超顺磁珠
试剂1
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
化学发光原理
化学发光检测主要是借助抗原和抗体在体 外特异结合后出现的各种现象，对样品中 的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检 测。 抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答 的物质。 抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结 合某种物质的球蛋白。
化学发光反应基本原理
双抗体夹心法（三明志法）原理
贝克曼
1.酶促化学发光 2.纯液相反应 3.通用型纳米免疫磁 珠 4.亲和素-生物素免疫 放大系统 5.碱性磷酸酶发光体 系 真正的全自动无人伺 候
方 法 学
检测 试剂
自动化 程度
真正的全自动无人伺候
真正的全自动无人伺 候
真正的全自动无人伺候
仪 器 性 能 及 参 数
检测速 度
单机检测速度最快一步法 ：恒速400test/h；两步法 ：恒速200test/h，自测试 开始第16.5分钟出第一个 测试结果，以后每隔9秒 出一个结果
线性范围
待测物浓度（ X ）
发光免疫分析基本操作步骤（一步法）
待测样品 酶标记抗体或抗 原 标记生物素的抗体或抗原 超顺磁珠 反应 管 反应10分钟 磁场中洗涤去除未结合的反 应物
反应0-5分钟 发光底物 仪器检测
发光免疫分析基本操作步骤（二步法）
超顺磁珠 待测样品 标记生物素的抗体或抗原 反应 管 反应10分钟 酶标记抗体或抗 原
各品牌对比
类别 丰汇
1.酶促化学发光 2.纯液相反应 3.通用型纳米免疫磁珠 4.亲和素-生物素免疫放大 系统 5.成熟的增强型鲁米诺发 光体系
雅培
1.吖啶酯直接化学发 光 2.半液相反应 3.非通用型磁珠，磁 珠上标记抗体（抗原 ）
罗氏
1.电化学发光 2.纯液相反应 3.通用型纳米免疫磁珠 4.亲和素-生物素免疫放 大系统
3.化学发光
化学发光是在常温下经化学反应所产生的
发射光。 化学发光是一个多步骤的过程，其机制为 某些化合物(发光剂或发光底物)可以利用一 个化学反应产生的能量使其产物分子或反 应中间态分子上升至电子激发态。当此产 物分子或中间态分子衰退至基态时，以发 射光子的形式释放能量(即发光)。
化学发光免疫技术中常用的化学 发光剂或发光底物
3.电化学发光剂
激发态的三联吡啶钌不稳定，很快发射出
一个波长为620nm的光子，回复到基态的三 联吡啶钌。这一过程可在电极表面周而复 始地进行，产生许多光子，使光信号增强 。
酶促化学发光免疫分析就是利用酶对发光
底物催化作用而直接发光，通过光强度的 测定而直接进行定量。
酶促化学发光免疫分析（双抗体夹心法）
化学发光免疫技术具备以下特点 ：
①高度敏感，极限达10-17~10-19M/L，远高于RIA
、EIA、TRFIA。 ②特异性强，重复性好C.V.＜10％。 ③测定范围宽，可达7个数量级。 ④试剂稳定性好，无污染有效期6－12月。 ⑤操作简单，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首 选方法。
洗涤去除未结合的反应物
反应10分钟 洗涤去除未结合的反应物
反应0-5分钟 发光底物 仪器检测
化学发光的应用
传染性疾病的检测：HBsAg、HBsAb、HBeAg、

HBeAb、HBcAb、anti-HCV、HIV等 甲状腺功能检测：TT3 、TT4 、T3 、T4 、TSH 糖尿病检测：INS、C-P等 肿瘤标志物检测：AFP、CEA、PSA、fPSA、 NSE、CA50、CA12-5、CA15-9、CA19-9等 性腺激素检测：E2、Testo、Prog、PRL、FSH、 LH、HCG 等
化学发光免疫技术是免疫测定技术继酶免
技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免 疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（ TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。
化学发光免疫技术是一种高度敏感的微量
测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半 抗原）都可以用化学发光免疫技术测定。 其起步于80年代初，快速发展于90年代， 在国外化学发光免疫技术的应用处于蓬勃 发展的阶段。
丰汇化学发光测定仪
磁 力 清 洗 站
十二步清洗工作站
独立的搅拌系统
独创永 久 性 反 应 装 置
高 精 密 度 单 光 子 计 数 系 统
单光子计数器是目前高灵敏度 发光检测仪的核心部件
激发光阴极 产生光电子 在各打拿极之间得到 能量和数目的倍增
在阳极上形 成较强信号
发光样品 产生光子
独到、灵巧的采用高灵敏度的PMT（光电倍增管）检测 系统。可以达到快速检测，检测结果稳定， 灵敏度高，设备运行无成本维护； 样品针采用特殊清洗方式，杜决交叉污染；
独立的磁珠试剂搅拌工作站，磁珠试剂分
布更加均匀，杜绝交叉污染； 维护成本低、无一次性耗材，采用永久反 应杯，无需更换； 操作简单方便，检测速度快，大大减小医 护工作者的劳动强度； 仪器成本适中，适合各级别医院使用，市 场潜力巨大；
上海丰汇
1. 光照发光

发光剂经短波长入射光照射后进入激发态 ，当回复至基态时发出较长波长的可见光 。
能 级 光子 电子e
基态
2. 生物发光

典型例子为萤火虫发光。反应底物为萤火 虫荧光素 (firefly luciferin)，在荧光素酶 (luciferase) 的催化下利用 ATP 产能，生成 激发态的氧化萤火虫荧光素 (oxyluciferin) ，后者在回复到基态时多余的能量以光子 形式放出。
酶促反应的发光底物 直接化学发光剂 电化学发光剂

1．酶促反应的发光底物
酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而 发出光的一类发光底物，目前化学发光酶 免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（ HRP）和碱性磷酸酶（ ALP），相应发光 底物为： HRP的发光底物 ：价格低廉、国内技术成 熟 ALP的发光底物 ：价格昂贵、国内无成熟 技术
最高速度200 test/h
最高速度180 test/h
100 test/h
操作模 式 反应杯
随机检测，急诊插入功能 120个永久性免维护反应 杯
随机检测，急诊插入 功能 一次性塑料杯，成本 高
随机检测，急诊插入功 能 一次性塑料杯，成本高
随机检测，急诊插入 功能 一次性塑料杯，成本 高
各品牌对比(续上表）
(1) HRP的发光底物
常用的底物为鲁米诺或其衍生物。 鲁米诺或其衍生物 鲁米诺的氧化反应在碱 性缓冲液中进行。
（2）ALP的发光底物
常用的底物为3-（2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-
4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙 烷（AMPPD）和4-甲基伞形酮磷酸盐（4MUP，荧光底物）。
AMPPD
AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相
当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分 解半衰期，发出波长为470nm的持续性光， 在15min时其强度达到高峰，15~ 60min内 光强度保持相对稳定。
2．直接化学发光剂
这类发光剂不需酶的催化作用，只需改变
溶液的pH等条件就能发光，如吖啶酯（ acridinium, AE）在含过氧化氢的稀碱溶液 中即能发光。
吖啶酯系统：雅培
HRP-Luminol系统
AP-AMPPD系统 无须原位进样、 以速率法测量。
电化学发光：罗氏
闪光与辉光及其测量方式的差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
速率法测量
原位进样
时间
发光与化学发光剂
一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时， 释放出的能量表现为光的发射，称为发光 (luminescence)。根据形成激发态分子的激 发能可将发光分为三种类型: 1.光照发光 2.生物发光 3.化学发光。
Hook(前滞)效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的原理
待测物
酶标记抗原
试剂1
超顺磁珠
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
上海丰汇生物研究有限公司
化学发光介绍
发光免疫技术

发光免疫技术(luminescence immunoassay, LIA)是 将发光分析和免疫反应相结合而建立的一 种新的免疫分析技术。这种方法不仅具有 发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高 度特异性,而且还具有分离简便,可以实现自 动化分析特点,使之成为医学、生物学研究 领域中一种新的重要的免疫学分析手段。
光电倍增管 高 压 高速分频器 高速比较器 高速放大器
相对发光单位 数字脉冲(RLU)
脉冲信号
高 精 密 度 微 量 加 样 系 统
精准的加样手系统
丰汇全自动液相化学发光检测系统
具有完全自主知识产权；
速度快：全球最快的全自动化学发光，最
高恒速可达600test/小时，目前雅培i2000理 论速度为200test/小时实际速度为165test/小 时左右；罗氏的电化学发光理论速度为 180test/小时，实际速度150test/小时左右； 全球首创永久性反应杯：无一次性耗材（ 如一次性反应杯、TIP头等），大大节省用 户成本。