常用固定液
特性
✓ 渗透力强，能迅速渗入组织内部 ✓ 不会使组织过度收缩或膨胀 ✓ 能硬化、固定组织，使细胞成分的形态和位置与
生活状态时相似。 ✓ 使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的
折光率。
常用的固定液
单纯固定液
① 10%甲醛（福尔马林）：甲醛浓度为40%，指10ml甲醛加入90ml的水配成的。 ② 乙醇（80%~90%最好） ③ 乙酸（醋酸、冰醋酸）
固 定 液
④ 红色字体为常用固定液
混合固定液
① 中性甲醇液： 甲醛120ml，蒸馏水880ml，磷
酸二氢钠4g，磷酸氢二钠13g配制而成，PH值 达到７。此固定液是人体组织和动物组织常用之 固定液，特别是作免疫组织化学染色固定时效果 较好。
② 乙醇-醋酸-甲醇液 ③ 乙醇-甲醇液（AF液）： 95%或无水乙醇
固定
目的
¤ 防止自溶和腐败 ¤ 凝固或沉淀细胞内物质 ¤ 硬化组织 ¤ 增加组织的折光率
固定
方法
• (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动
物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定， 通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过 大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一 般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
当大小和数量的组织块，用于制作组织切
片的过程。
切 片 刀
取材
要求
(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体
后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结 构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为
2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入 组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想 体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以 薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间， 若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制 作出较多的教学切片。
• (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固
定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行 固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入 血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的 固定。
• (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛
蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸 或甲醛蒸汽接触固定。
• 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但 因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作 用，在制作科研、教学切片时一般不用该 试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要 经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为 透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、 水杨酸甲酯等
及 时 的 进 行 核 对
脱水
目的
➢组织块经巩固定和水洗后，含有大量水分， 而水与苯、二甲苯等透明剂不混溶,故在组 织前必须用能与透明剂相混合的脱水剂(如 乙醇等),把组织内的水分置出来,为下一步做 准备。
常用的脱水剂
① 乙醇（最常用的脱水剂）
② 沸点78.4℃，脱水能力强，能硬化组织，可较 好地与二甲苯混合。
固 定 液
组织固定的常见问题
固定时间正常， 但固定时间效果差
固定液使用时间较长，有效浓度降低 固定液的量不足
标本过薄 标本扭曲变形，过脆过硬 固定液浓度过高，过程过强
固定时间长 标本之间重叠或与容器壁、底部紧贴 标本局部固定不良 标本过多，容器太少 标本轻，漂浮于固定液面
标本过大，过厚 标本中心固定不透 固定液渗透力强，浓度高使组织表层迅速硬化
90ml，40%甲醛10ml配制而成 ④ Bouin液 ⑤ Zenker液
红色字体为常用固定液
固定的注意事项
♦ 及时固定（夏天超过4h，冬天超过24h组织会干涸、自溶、腐败。） ♦ 固定容器宜大 ♦ 固定液应足量（为被固定组织体积的10~20倍） ♦ 防止组织变形 ♦ 确定恰当的固定时间（12~24h）
脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度 乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。
柔嫩组织的脱水应从50%或30%乙醇开始 组织在高浓度乙醇（无水乙醇）中留置时间不宜过
长。
② 丙酮
③ 沸点56℃，可用于染色前后的脱 水，对组织的脱水作用，收缩作 用均比乙醇强，价格较高，一般 很少单纯使用。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，
可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现
象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
二、固定
定义
将组织浸入某些化学试剂。使组织细胞内所含 物质尽量保持在生活状态时形态结构和位置的过 程。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪
要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免 因挤压而使组织、细胞变形。
4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取
材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为 好。
① 含水固定液的洗涤方法（常用的是甲醛，用
自来水冲洗即可）
② 含乙醇固定液的洗涤方法（用乙醇或乙醇混 合液固定的组织，一般不需要清洗）
③ 特殊固定液的洗涤方法（使用的固定液不同，
洗涤的方法也不一样）
脱水
定义
标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的 水分，必须将组织块内的水分置换出来， 这一过程。
• 无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片， 都必须除去组织中所含水分，因含水组织 与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用 的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
固定时间短 固定液失效
固定不充分
固定充分
三、洗涤、脱水、透明
洗涤
定义
用水或乙醇等组织经过固定处理后， 未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉 的过程。
洗涤
目的
✓去掉未与组织结合的固定液及沉淀物 ✓避免组织中留有较多的固定液而妨碍
脱水 ✓组织中生成的沉淀物或结晶而影响染
色和观察 ✓可减少甲醛色素
洗涤的方法
病理组织切片技术优秀课件
病理组织制片技术
定义
• 要实现对病变组织的显微镜形 态学检查，需要将获得的病变 组织制片。我们将切片制作所
采• • • • • • • • • • •
基
取固洗脱透浸包切展贴烤染封
础
材定涤水明蜡埋片片片片色片
制
作
流
程
一、取材
定义
•
按照病理检查的目的和要求，切取适